Роль белков О6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы и р53 в ответе клеток нейробластомы на воздействие алкилирующего агента темозоломида

Обложка

Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель. Изучить роль белка р53 и О6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы в чувствительности клеток нейробластомы к действию темозоломида.

Методы. Исследование проводили на клеточной линии нейробластомы SK.N.SH, культивируемой в среде DMEM с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки и антибиотиков пенициллина-стрептомицина в стандартных условиях (37 °C и 5% СО2). Клетки инкубировали с алкилирующим агентом темозоломидом в течение 48-72 ч. В ряде случаев осуществляли преинкубацию клеток в течение 2 ч с О6-бензилгуанином (ингибитором О6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы) или нутлином-3а (реактиватором р53). Пролиферативную активность оценивали с помощью системы многопараметрического анализа клеточных культур (RTCA iCELLigence), а также колориметрического MTS-теста. Экспрессию белков определяли методом иммуноблоттинга с использованием соответствующих моноклональных антител.

Результаты. Реактивация белка р53 приводила к значительному снижению скорости пролиферации клеток линии SK.N.SH. Цитотоксический эффект данного препарата более выражен по сравнению с темозоломидом, считающимся препаратом выбора при проведении химиотерапии пациентам с мультиформной глиобластомой и нейробластомой. Ингибирование О6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы также приводило к усилению цитотоксического эффекта темозоломида, тем не менее, цитотоксический эффект химиопрепарата был менее выраженным по сравнению с действием темозоломида на фоне реактивации белка р53.

Вывод. Для оценки чувствительности клеток нейробластомы к действию алкилирующего препарата темозоломида функциональное состояние белка р53 в опухолевых клетках служит более важным прогностическим критерием по сравнению с уровнем экспрессии О6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы; кроме того, реактивация белка р53 приводит к снижению скорости пролиферации клеток нейробластомы линии SK.N.SH и их гибели по механизму апоптоза.

Об авторах

Рамиль Рамисович Хуснутдинов

Казанский государственный медицинский университет

Автор, ответственный за переписку.
Email: boichuksergei@mail.ru
г. Казань, Россия

Сергей Васильевич Бойчук

Казанский государственный медицинский университет

Email: boichuksergei@mail.ru
г. Казань, Россия

Список литературы

  1. Schwab M., Westermann F., Hero B., Berthold F. Neuroblastoma: biology and molecular and chromosomal pathology. Lancet Oncol. 2003; 4 (8): 472-480. doi: 10.1016/S1470-2045(03)01166-5.
  2. Brodeur G.M. Neuroblastoma: biological insights into a clinical enigma. Nat. Rev. Cancer. 2003; 3 (3): 203-216. doi: 10.1038/nrc1014.
  3. Günther W., Pawlak E., Damasceno R. et al. Temozolomide induces apoptosis and senescence in glioma cells cultured as multicellular spheroids. Br. J. Cancer. 2003; 88 (3): 463-469. doi: 10.1038/sj.bjc.6600711.
  4. Johnson D.R., O’Neill B.P. Glioblastoma survival in the United States before and during the temozolomide era. J. Neuro-Oncol. 2012; 107 (2): 359-364. doi: 10.1007/s11060-011-0749-4.
  5. Krex D., Klink B., Hartmann C. et al. Long-term survival with glioblastoma multiforme. Brain. 2007; 130 (Pt. 10): 2596-2606. doi: 10.1093/brain/awm204.
  6. De Sio L., Milano G.M., Castellano A. et al. Temozolomide in resistant or relapsed pediatric solid tumors. Pediatr. Blood Cancer. 2006; 47 (1): 30-36. doi: 10.1002/pbc.20516.
  7. Rubie H., Chisholm J., Defachelles A.S. et al. Société Françaisedes Cancers de l’Enfant, United Kingdom Children Cancer Study Group-New Agents Group Study: Phase II study of temozolomide in relapsed or refractory high-risk neuroblastoma: a joint Société Française des Cancers de l’Enfant and United Kingdom Children Cancer Study Group-New Agents Group Study. J. Clin. Oncol. 2006; 24: 5259-5264. doi: 10.1200/JCO.2006.06.1572.
  8. Pegg A.E. Properties of mammalian O6-alkylguanine-DNA transferases. Mutat. Res. 1990; 233: 165-175. doi: 10.1016/0027-5107(90)90160-6.
  9. Ramalho-Carvalho J., Pires M., Lisboa S. et al. Altered Expression of MGMT in high-grade gliomas results from the combined effect of epigenetic and genetic aberrations. PLoS One. 2013; 8 (3): e58206. doi: 10.1371/journal.pone.0058206.
  10. Goellner E.M., Grimme B., Brown A.R. et al. Overcoming temozolomide resistance in glioblastoma via dual inhibition of NAD+ biosynthesis and base excision repair. Cancer Res. 2011; 71 (6): 2308-2317. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-3213.
  11. Itahana K., Dimri G., Campisi J. Regulation of cellular senescence by p53. Eur. J. Biochem. 2001; 268: 2784-2791. doi: 10.1046/j.1432-1327.2001.02228.x.
  12. Chin L., Meyerson M., The Cancer Genome Atlas Research Network. Comprehensive genomic characterization defines human glioblastoma genes and core pathways. Nature. 2008; 455: 1061-1068. doi: 10.1038/nature07385.
  13. Ingeborg M.M. van Leeuwen, Bhavya Rao, Marijke C.C. Sachweh, Laín S. An evaluation of small-molecule p53 activators as chemoprotectants ameliorating adverse effects of anticancer drugs in normal cells. Cell Cycle. 2012; 11 (9): 1851-1861. doi: 10.4161/cc.20254.
  14. Apontes P., Leontieva O.V., Demidenko Z.N. et al. Exploring long-term protection of normal human fibroblasts and epithelial cells from chemotherapy in cell culture. Oncotarget. 2011; 2: 222-233. doi: 10.18632/oncotarget.248.
  15. Carvajal D., Tovar C., Yang H. et al. Activation of p53 by Mdm2 antagonists can protect proliferating cells from mitotic inhibitors. Cancer Res. 2005; 65: 1918-1924. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-04-3576.
  16. Xiong Y., Hannon G.J., Zhang H. et al. p21 is a universal inhibitor of cyclin kinases. Nature. 1993; 366 (6456): 701-704. doi: 10.1038/366701a0.
  17. Tovar C., Rosinski J., Filipovic Z. et al. Small-molecule MDM2 antagonists reveal aberrant p53 signaling in cancer: Implications for therapy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006; 103 (6): 1888-1893. doi: 10.1073/pnas.0507493103.
  18. Villalonga-Planells R., Coll-Mulet L., Martínez-Soler F. et al. Activation of p53 by nutlin-3a induces apoptosis and cellular senescence in human glioblastoma multiforme. PLoS One. 2011; 6 (4): e18588. doi: 10.1371/journal.pone.0018588.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© 2018 Хуснутдинов Р.Р., Бойчук С.В.

Creative Commons License

Эта статья доступна по лицензии
Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.



Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».