Email this article Sample screening and residue assessment of 214 drugs for animals in food products by chromatography-mass spectrometry high resolution
- Authors: Amelin V.G.1, Lavrukhina O.I.1, Tretyakov A.V.1, Batov I.V.1, Kish L.K.1
-
Affiliations:
- Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов
- Issue: Vol 79, No 3 (2024)
- Pages: 244-262
- Section: ORIGINAL ARTICLES
- Submitted: 09.08.2024
- Accepted: 09.08.2024
- URL: https://bakhtiniada.ru/0044-4502/article/view/261410
- DOI: https://doi.org/10.31857/S0044450224030057
- EDN: https://elibrary.ru/vqmefh
- ID: 261410
Cite item
Full Text
Abstract
Сочетание скрининга проб и последующего подтверждающего определения загрязнителей является оптимальной стратегией рутинных исследований при реализации программ мониторинга безопасности пищевой продукции. Ультравысокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрией высокого разрешения предложена для многокомпонентного определения остаточных содержаний широкого спектра лекарственных препаратов для ветеринарного применения и их метаболитов с минимальной пробоподготовкой. Для нивелирования матричного эффекта использовали метод изотопного разбавления. Предлагаемая вданной работе методика позволяет одновременно идентифицировать и оценить остаточные содержания 214 лекарственных препаратов для ветеринарного применения на уровне их предела обнаружения 0.1–10.0 нг/г, существенно сократить продолжительность (40−50 мин) и стоимость анализа.
Full Text
Методикиодновременного определения остаточных содержаний лекарственных средств для ветеринарного применения и их метаболитов необходимы при проведении мониторинга безопасности продовольственного сырья и продуктов питания [1, 2]. Учитывая большой объём рутинных исследований, подход, включающий скрининг проб на максимально широкий спектр загрязнителей и последующий подтверждающий анализ в случае обнаружения, является наиболее оптимальным. Он позволяет снизить затраты, но сохранить необходимую выборку для обеспечения репрезентативности результатов при контроле пищевой безопасности. Задача одновременного определения большого числа загрязнителей разных классов в настоящее время решается хроматографическими методами с масс-спектрометрическим детектированием [3]. Принимая во внимание различия в физико-химических свойствах действующих веществ ветеринарных препаратов, необходимо использовать общие условия экстракции, хроматографического разделения и обнаружения. При многокомпонентном анализе методами высокоэффективной и ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (УВЭЖХ- и ВЭЖХ–МС/МС) при пробоподготовке наиболее распространены подходы QuEChERS и твердофазно-, жидкостно-жидкостная экстракция в сочетании с последующей очисткой методом твердофазной экстракции [4] (табл. 1).
Методики, сочетающие не только УВЭЖХ, но и ВЭЖХ с тандемной масс-спектрометрией и масс-спектрометрией высокого разрешения (МС-ВР), позволяют одновременно идентифицировать множество соединений разных классов и могут быть использованы для скрининга большого числа проб. При этом для УВЭЖХ характерно бóльшее разрешение хроматографических пиков, благодаря высокой скорости потока они существенно ýже (как правило, 1–3 с), соответственно появляется возможность сократить время хроматографирования и в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения, времяпролётной (МС-ВП) или Orbitrap увеличить число одновременно идентифицируемых соединений [3] (табл. 1). В случае МС-ВР идентификацию и определение проводят по точным массам ионов-прекурсоров, как правило, без фрагментации (в режиме МС/МС – по ионам-продуктам). Стандартное разрешение МС-ВР как минимум в 20 раз выше, чем масс-спектрометрии с низким разрешением [30] (при использовании времяпролётного детектора до 15 000 FWHM [31–34], квадруполь-времяпролётного до 50 000 FWHM [35, 36], орбитальной ловушки до 100 000 FWHM [37, 38]). Метод очень избирателен и благодаря измерению точных масс соединений даёт возможность различать даже незначительные изменения в их структуре [39]. Масс-спектрометрия высокого разрешения позволяет разделять пики соединений с близкими соотношениями m/z и определять их на уровне 2–5 млн–1, что крайне важно для многокомпонентного анализа сложных матриц, в том числе образцов продовольственного сырья и пищевых продуктов.
Таблица 1. Характеристики методик одновременного определения ветеринарных препаратов
Число опреде-ляемых анали-тов | Матрица; пробоподготовка; степень извлечения, % | Метод; колонка; продолжительность хроматографирования | Предел обнаружения/ определения, мкг/кг | Лите-рату-ра |
11 | Яйца; ЖЖЭ + магнитная ДТФЭ; 75–104 | УВЭЖХ–МС-ВР (Orbitrap); Hypersil GOLD aQ C18 (150 ґ) | 0.12–1 532.0/– | [5] |
13 | Молоко; QuEChERS; 62–125 | ВЭЖХ–МС/МС; XTerra C18 (50×3 мм, 3.5 мкм); 20 мин | 0.3–16.6/ 1.0–50.0 | [6] |
18 | Молоко, курица, свинина, говядина; QuEChERS; 73.9–135 | ВЭЖХ–МС/МС; Acclaim Polar Advantage II C18 (150×2.1 мм, 3 мкм); 26 мин | 0.1–0.21/ 0.03–0.66 | [7] |
23 | Рыба и мясо; ТЖЭ*; 82–119 | ВЭЖХ–МС/МС; Phenomenex Aqua C18 (150×2.1 мм, 3 мкм); 18 мин | 0.3–15.0/ 0.8–45.3 | [8] |
25 | Молоко; QuEChERS; 63–126 | ВЭЖХ–МС/МС; Zorbax Eclipse Plus C18 (50 ґ) | 0.02–0.4 (CCβ) /– | [9] |
26 | Молоко; QuEChERS; 75–120 | ВЭЖХ–МС/МС; Symmetry C18 (150×2.1 мм, 5 мкм); 10 мин | –/8.0–12.0 | [10] |
60 | Тилапия; ТЖЭ + ДТФЭ-очистка; 81–111 | УВЭЖХ–МС-ВР (Orbitrap); Hypersil Gold aQ C18 (100 ґ) | 0.01–4.73 (CCβ)/– | [1] |
60 | Козье молоко; ЖЖЭ + ТФЭ-очистка; 60.1–110.0 | УВЭЖХ–МС-ВР (Orbitrap); Hypersil Gold aQ C18 (100×2.1 мм, 1.9 мкм); 12 мин | 0.5–1.0/ 5.0–10.0 | [11] |
63 | Курица; ТЖЭ + ТФЭ-очистка; 83–117 | ВЭЖХ–МС/МС; Acclaim 120 C18 (100×2.1 мм, 3 мкм); 12 мин | 0.01–0.3/ 0.02–1.0 | [12] |
66 | Молоко; ЖЖЭ + ТФЭ-очистка; 70–120 | УВЭЖХ–МС/МС; Zorbax RRHD Eclipse Plus C18 (50×2.1 мм, 1.8 мкм); 10.5 мин | –/0.02–18.5 | [13] |
75 | Детское питание; ТЖЭ + ЖЖЭ-очистка, фильтрация; 79.8–110.7 | УВЭЖХ–МС-ВР (Orbitrap); Accucore aQ C18 (100×2.1 мм, 2.6 мкм); 9.5 мин | 0.01–5.35/ 0.01–9.27 | [14] |
78 | Яйца; ЖЖЭ + ДТФЭ-очистка; 70.5–119.2 | УВЭЖХ–МС/МС; Acquity UPLC BEH C18 (100×2.1 мм, 1.7 мкм); 9.5 мин | 0.03–0.33/ 0.1–1.0 | [15] |
>100 | Мышечная ткань КРС; ТЖЭ + ДТФЭ-очистка; 70–120 | УВЭЖХ–МС/МС; Acquity RP HSS T3 (100×2.1 мм, 1.8 мкм); 9.5 мин | – | [16] |
105 | Молоко, мясо, рыба, яйца, жир; QuEChERS; 70–120 | УВЭЖХ–МС/МС; Acquity BEH VanGuard (2.1×5 мм, 1.7 мкм) + Acquity BEH C18 LC (100×2.1 мм, 1.7 мкм); 16 мин | 0.3–15.0/– | [17] |
112 | Мясо; ТЖЭ + ДТФЭ-очистка; 95.6–101.0 | ВЭЖХ–МС/МС; XSelect HHS T3, (150×3 мм, 2.5 мкм); 25 мин | 0.2–13.6/ 0.9–48.0 | [18] |
117 | Детское питание; QuEChERS, – | УВЭЖХ–МС-ВП; RRHD Eclipse-Plus C18 (50 ґ) | –/<10 | [19] |
132 | Молоко; ЖЖЭ + магнитная ДТФЭ; 72–120 | ВЭЖХ–МС/МС; Acclaim 120 C18 (100×2.1 мм, 3 мкм); 25 мин | 0.015–0.3/0.05–1 | [20] |
140 | Курица; ТЖЭ + ЖЖЭ + ДТФЭ-очистка; 70–120 | УВЭЖХ–МС/МС; Acquity HSS T3 (100×2.1 мм, 1.8 мкм); 12 мин | ≤1.0/0.05–10.0 | [21] |
Число опреде-ляемых анали-тов | Матрица; пробоподготовка; степень извлечения, % | Метод; колонка; продолжительность хроматографирования | Предел обнаружения/ определения, мкг/кг | Лите-рату-ра |
141 | Свинина; ТЖЭ, ТФЭ-очистка; >70 | ВЭЖХ–МС-ВП; Poroshell 120 EC–C18 (150×2.1 мм, 2.7 мкм); 27 мин | 0.1–5.0/ 0.1–10.0 | [22] |
155 | Свинина, говядина, баранина, курица, свиная и куриная печень; ТЖЭ + ТФЭ-очистка; 79.2–118.5 | УВЭЖХ–МС-ВР (Orbitrap); Eclipse plus C18 (150×3.0 мм, 1.8 мкм); 28 мин | 0.1–10.0/– | [23] |
155 | Свинина, говядина, баранина; ТЖЭ + ТФЭ-очистка; 60–120 | УВЭЖХ–МС/МС; Eclipse Plus C18 (150×3.0 мм, 1.8 мкм); 22 мин | 0.5–5.0/ 2.0–20.0 | [24] |
164 | Свинина, говядина, курица; ТЖЭ + вымораживание; 70.0–120.0 | ВЭЖХ–МС-ВР (Orbitrap); Phenomenex Luna Omega (100×2.1 мм, 1.6 мкм); 20 мин | >0.18 (CCβ)/– | [25] |
169 | Яйца; ЖЖЭ; 70.0–120.0 | УВЭЖХ–МС/МС; Acquity HSS T3 (100×2.1 мм, 1.8 мкм); 10.5 мин | – | [26] |
182 | Продукция аквакультуры; ТЖЭ (2 этапа) + ДТФЭ-очистка; 70.0–120.0 для большинства соединений | ВЭЖХ–МС-ВП; ACQUITY BEH C18 (100×2.1 мм, 1.7 мкм); 23 мин | –/≤10.0 | [27] |
>200 | Карп, угорь, креветки, краб, мидии; ТЖЭ (2 этапа); 70–120 для большинства соединений | УВЭЖХ–МС-ВР (Orbitrap); Accucore RP-MS C18 (100×2.1 мм, 2.6 мкм); 25 мин | –/1.0–50.0 (скрининговый предел) | [28] |
291 | Протеиновый порошок; ДТФЭ; 65.6–142.2 | УВЭЖХ–МС/МС; Acquity HSS-T3 (100×2.1 мм, 1.8 мкм); 16 мин | –/0.1–50.0 | [29] |
Обозначения: ТЖЭ, ЖЖЭ – твердофазно-жидкостная и жидкостно-жидкостная экстракция; ДТФЭ – дисперсионная твердофазная экстракция; ССβ – возможность обнаружения.
Высокоэффективная жидкостная хроматография с МС-ВР-детектированием (Orbitrap) позволяет одновременно идентифицировать и определять остаточные содержания более 200 действующих веществ препаратов для ветеринарного применения и их метаболитов, принадлежащих к разным классам: антибиотики, противовоспалительные препараты, антигельминтики, кортикостероиды, гормоны, тиреостатики, транквилизаторы, амфетамины, а также β-агонисты в яйцах, рыбе и другой продукции аквакультуры, детском питании, мясе и субпродуктах (табл. 1). Разработаны скрининговые УВЭЖХ–МС-ВП-методики определения 630 загрязнителей, включая 117 лекарственных препаратов разных групп в мясорастительном пюре для детей [19], 141 – в свинине [22], 182 – в продукции аквакультуры [27].
Компоненты матрицы оказывают влияние на извлечение аналитов, селективность и чувствительность их определения даже в случае использования МС-ВР-детектирования. Снижения матричного эффекта можно добиться дополнительной очисткой экстрактов, но это существенно усложняет процедуру анализа на стадии пробоподготовки. Для повышения надежности идентификации и точности определения используют изотопно меченные внутренние стандарты [22] и метод изотопного разбавления [40].
Ранее нами опубликована работа [41], в которой содержание β-лактамных антибиотиков в пищевых продуктах определяли методом добавок: сначала проводили скрининг проб по точным массам ионов, затем в случае обнаружения соединения из данного класса анализ повторяли с добавкой стандартного раствора найденного антибиотика.
Цель данной работы заключалась в разработке универсальной УВЭЖХ–МС-ВП-методики скрининга и оценки остаточных содержаний широкого спектра лекарственных препаратов ветеринарного назначения в пищевых продуктах с упрощенной пробоподготовкой и использованием метода изотопного разбавления для нивелирования матричного эффекта.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Аппаратура. Использовали ультравысокоэффективный жидкостной хроматограф UltiMate 3000 (Thermo Scientific, США) в сочетании с квадруполь-времяпролетным масс-спектрометрическим детектором maXis Impact, maXis 4G и электрораспылительным устройством ionBooster (Bruker Daltonics, Германия). Разделение проводили в режиме градиентного элюирования на колонке 30×2.1 мм, 1.7 мкм ACQUITY UPLC® BEN C18 (Waters, США)
Реактивы. Использовали ацетонитрил (Schar-lab S.L., Испания) 99.9%; изопропиловый спирт (Scharlab S.L., Испания) для ВЭЖХ; метанол (Panreac, ЕС) PA-ACS-ISO; этилендиаминтетраацетат натрия (ЭДТА) (ХИММЕД, Россия) 99.0%; хлорид натрия (ХИММЕД, Россия) х. ч.
Использовали стандартные образцы (Dr. Ehren-storfer, Fluka, Sigma-Aldrich и др., табл. 2) сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов и цефалоспоринов, амфениколов, кокцидиостатиков, нестероидных противовоспалительных средств, антигельминтиков, хинолонов, макролидов, линкозамидов, седативных средств, плевромутилинов, хиноксалинов, полипептидов, красителей, β-агонистов, а также изотопно меченные стандарты, соответствующие этим классам веществ. Содержание основного вещества во всех использованных стандартах составляло 87.0–99.1%.
Исходные растворы с концентрацией 1 мг/мл готовили растворением соответствующей навески (с учетом содержания основного вещества) в метаноле или в ацетонитриле. Хранили растворы при –20 оC не более шести месяцев. Рабочие растворы готовили разбавлением исходных водой в день использования.
Пробоподготовка. В центрифужную пробирку емк. 15 мл вносили 1.00 г тщательно измельченной пробы (1.00 г мёда растворяли в 1 мл воды), добавляли 2.0 мл ацетонитрила, 0.5 г NaCl, 40.0 мг ЭДТА, перемешивали в течение 5 мин и центрифугировали в течение 5 мин при 2 700 об/мин. Отбирали верхний ацетонитрильный слой во флакон и упаривали досуха при 40 оC в токе азота с использованием устройства RapidVap LABCONCO, США, к сухому остатку добавляли 50 мкл метанола и 950 мкл деионизованной воды, перемешивали 5 мин и фильтровали через мембранный фильтр 0.20 мкм (GHP ACRODISC13, PALL, США) в микрофлакон для хроматографирования.
Оценка матричного эффекта (МЭ). Для оценки МЭ использовали соотношение площадей хроматографических пиков, полученных в условиях анализа экстракта из матрицы, не содержащей исследуемых соединений, и деионизованной воды. Матричный эффект рассчитывали по формуле:
МЭ (%) = (Sx /S0–1) × 100,
где Sx, S0 – площади хроматографических пиков экстрактов из матрицы и деионизованной воды соответственно.
Условия хроматографического разделения и детектирования. Подвижная фаза состояла из 0.1%-ной муравьиной кислоты в воде (А) и 0.1%-ной муравьиной кислоты в ацетонитриле (Б). Осуществляли градиентное элюирование: 0 мин – 5% Б, 0.5 мин – 5% Б, 2 мин – 50% Б, 5 мин – 100% Б, 6 мин – 5% Б, 10 мин – 5% Б. Скорость потока подвижной фазы 0.4 мл/мин. Температура хроматографической колонки 50 оC, объем вводимой пробы 50 мкл. Температура термостата автосамплера 10 оC.
Таблица 2. Основные характеристики 214 ветеринарных препаратов, определяемых методом ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии высокого разрешения в пищевых продуктах
Аналит | Производи-тель, CAS- номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
Линкозамиды (2) | ||||||||
Клиндамицин | Sigma-Aldrich, 58207-19-5 | C18H33ClN2O5S | [M+H]+ | 3.8 | 425.1871 | 0.5 | 0.9/0.8 | –21/–66 |
Линкомицин | TRC, 859-18-7 | C18H34N2O6S | [M+H]+ | 2.5 | 407.2210 | 0.5 | 0.4/0.5 | –39/–67 |
Клинда-мицин-D3 | TRC, 1356933-72-6 | C18H30D3ClN2O5S | [M+H]+ | 3.8 | 428.2060 | 0.5 | –20/–66 | |
Макролиды (12) | ||||||||
Азитромицин | TRC, 83905-01-5 | C38H72N2O12 | [M+H]+ | 3.7 | 749.5158 | 0.5 | 1.3/1.5 | –20/–30 |
Джозамицин | Santa Cruz Biotechnology, 16846-24-5 | C42H69NO15 | [M+H]+ | 4.4 | 828.4818 | 0.5 | 0.4/0.5 | –12/–21 |
Кларитромицин | Sigma-Alrdich, 81103-11-9 | C38H69NO13 | [M+H]+ | 4.3 | 748.4842 | 0.5 | 0.3/0.2 | +30/–61 |
Рокситромицин | Sigma-Aldrich, 80214-83-1 | C41H76N2O15 | [M+H]+ | 4.3 | 837.5318 | 0.5 | 1.2/1.3 | +15/–45 |
Спирамицин | Santa Cruz Biotechnology, 24916-50-5 | C43H74N2O14 | [M+2H]2+ | 3.7 | 422.2607 | 0.5 | 0.4/0.4 | –15/–83 |
Тилмикозин | Dr.Ehrenstorfer, 108050-54-0 | C46H80O13N2 | [M+H]+ | 3.9 | 869.5738 | 0.5 | 1.4/1.3 | –20/+36 |
Тилозин | Sigma-Aldrich, 001405-54-5 | C46H77O17N | [M+H]+ | 4.1 | 916.5270 | 0.5 | 0.7/0.9 | +2/–50 |
Тилвалозин | TRC, 63409-12-1 | C53H87O19N | [M+H]+ | 4.4 | 1042.5945 | 0.5 | 0.6/0.6 | +38/–66 |
Тулатромицин | TRC, 217500-96-4 | C41H79O12N3 | [M+2H]2+ | 4.3 | 403.7905 | 0.5 | 0.8/08 | –10/–29 |
Эритромицин | Fluka, 114-07-8 | C37H67O13N | [M+H]+ | 4.1 | 734.4690 | 0.5 | 0.6/06 | –4/–60 |
Китасамицин | LGC, 1392-21-8 | C40H67NO14 | [M+H]+ | 4.3 | 786.4634 | 0.5 | 1.9/1.8 | –15/–67 |
Тилдипирозин | TRC, 328898-40-4 | C41H71N3O8 | [M+H]+ | 3.3 | 734.5313 | 1.0 | 2.3/2.5 | –6/–68 |
Азитромицин-D3 | TRC, 163921-65-1 | C38H69N2O12D3 | [M+H]+ | 3.7 | 752.5346 | 0.5 | –19/–35 | |
Амфениколы (4) | ||||||||
Тиамфеникол | Sigma-Aldrich, 15318-45-3 | C12H15Cl2NO5S | [M–H]– [M+Cl]– | 2.2 | 353.9964 389.9731 | 1.0 | 2.4/2.5 | –11/–79 |
Флорфеникол | TRC, 73231-34-2 | C12H14NO4Cl2SF | [M-H]– [M+Cl]– | 3.7 | 355.9921 393.9659 | 1.0 | 1.0/1.2 | –44/–80 |
Хлорамфеникол | Dr.Ehrenstorfer, 56-75-7 | C11H12Cl2N2O5 | [M-H]– [M+Cl]– | 4.0 | 321.0051 356.9805 | 0.2 | 0.7/0.8 | –15/–67 |
Хлорамфеникола сукцинат | Sigma-Aldrich, 982-57-0 | C15H15Cl2N2O8Na | [M–Na]– | 4.3 4.4 | 421.0200 | 1.0 | 0.6/0.5 | –16/–68 |
Хлорам-феникол-D5 | Witega, NA | C11H7D5Cl2N2O5 | [M–H]– [M+Cl]– | 4.0 | 326.0353 362.0120 | 0.2 | –15/–65 | |
Метаболиты нитрофуранов (4) (после гидролиза пробы и дериватизации) | ||||||||
АМОЗ | Witega, 43056-63-9 | C15H18N4O5 | [M+H]+ | 2.2 | 335.1350 | 0.5 | 0.1/0.1 | –10/–29 |
Анатлит | Производи-тель, CAS номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
АОЗ | Witega, 8065-9 | C10H9N3O4 | [M+H]+ | 3.7 | 236.0665 | 0.5 | 1.3/1.2 | –4/–16 |
СЕМ | Sigma-Aldrich, 563-41-7 | C8H8N4O3 | [M+H]+ | 3.5 | 209.0669 | 1.0 | 0.8/0.9 | –5/–67 |
АГД | Witega, 6301-02-6 | C10H8N4O4 | [M+H]+ | 2.8 | 249.0618 | 1.0 | 2.2/2.4 | –6/–68 |
АОЗ-D4 | Witega, 1188331-23-8 | C10H5D4N3O4 | [M+H]+ | 3.7 | 240.0917 | 0.5 | –4/–19 | |
Пенициллины (11) | ||||||||
Пенициллин G | Sigma-Aldrich, 113-98-4 | C16H18N2O4S | [M+СН3ОН+H]+ | 4.0 | 367.1322 | 5.0 | 0.3/0.3 | –20/–38 |
[M+H]+ | 3.1 | 335.1060 | ||||||
[M–H]– | 4.6 | 333.0903 | ||||||
Пенициллин V | Sigma-Aldrich, 132-98-9 | C16H18N2O5S | [M+СН3ОН+H]+ [M+H]+ | 4.2 4.2 | 383.1271 351.1009 | 10 | 0.7/0.7 | –21/–42 |
[M–H]– | 4.8 | 349.0853 | ||||||
Ампициллин | Sigma-Aldrich, 7177-48-2 | C16H19N3O4S | [M+СН3ОН+H]+ | 3.5 | 382.1431 | 1.0 | 1.5/1.7 | –10/–30 |
[M+H]+ | 2.9 | 350.1169 | ||||||
[M–H]– | 2.9 | 348.1013 | ||||||
Оксациллин | Sigma-Aldrich, 7240-38-2 | C19H19N3O5S | [M+СН3ОН+H]+ | 4.4 | 434.1380 | 10 | 0.5/0.6 | –22/–39 |
[M+H]+ | 4.4 | 402.1118 | ||||||
[M–H]– | 4.9 | 400.0961 | ||||||
Амоксициллин | Sigma-Aldrich, 61336-70-7 | C16H19N3O5S | [M+СН3ОН+H]+ | 2.9 | 398.1380 | 5.0 | 3.8/3.5 | –35/–68 |
Диклоксациллин | Dr.Ehrenstorfer, 13412-64-1 | C19H17Сl2N3O5S | [M+СН3ОН+H]+ | 4.6 | 502.0601 | 5.0 | 0.9/0.9 | –12/–56 |
[M+H]+ | 4.4 | 470.0339 | ||||||
[M–H]- | 5.3 | 468.0182 | ||||||
Клоксациллин | Sigma-Aldrich, 642-78-4 | C19H18Сl N3O5S | [M+СН3ОН+H]+ | 4.5 | 468.0990 | 10 | 0.1/0.1 | –31/–56 |
[M+H]+ | 4.5 | 436.0728 | ||||||
[M–H]– | 5.1 | 434.0572 | ||||||
Нафциллин | USP, 985-16-0 | C21H22N2O5S | [M+СН3ОН+H]+ | 4.5 | 447.1584 | 1.0 | 0.4/0.4 | –32/–46 |
[M+H]+ | 3.2 | 415.1322 | ||||||
[M–H]– | 5.2 | 413.1166 | ||||||
Карбенициллин | EPRS, 4800-94-6 | C17H18N2O6S | [M+CH3OH+H]+ | 3.9 | 411.1220 | 10 | 0.5/0.6 | –21/–46 |
[M+H]+ | 3.8 | 379.0958 | ||||||
Пиперациллин | EDQM, 59703-84-3 | C23H27N5O7S | [M+CH3OH+H]+ | 4.0 | 550.1966 | 10 | 0.5/0.7 | –15/–63 |
[M+H]+ | 4.0 | 518.1707 | ||||||
Тикарциллин | Sigma-Aldrich, 4697-14-7 | C15H16N2O6S2 | [M+CH3OH+H]+ | 3.8 | 417.0784 | 10 | 0.5/0.5 | –30/–39 |
[M+H]+ | 3.7 | 385.0523 | ||||||
Пенициллин G-D7 | Sigma-Aldrich, 11217445-37-8 | C16H11D7N2O4S | [M+СН3ОН+H]+ | 4.0 | 374.1761 | 5.0 | –20/–30 | |
[M+H]+ | 3.1 | 342.1499 | ||||||
[M–H]– | 4.6 | 340.1343 | ||||||
Нитроимидазолы (10) | ||||||||
Диметридазол | Sigma-Aldrich, 551-92-8 | C5H7N3O2 | [M+H]+ | 0.8 | 142.0611 | 0.5 | 1.3/1.0 | +2/+60 |
Ипронидазол | LGC, 14885-29-1 | C7H11N3O2 | [M+H]+ | 3.3 | 170.0924 | 1.0 | 1.3/1.1 | +5/+30 |
Метронидазол | Sigma-Aldrich, 443-48-1 | C6H9N3O3 | [M+H]+ | 0.7 | 172.0717 | 0.5 | 0.5/0.4 | –38/–78 |
Анатлит | Производи-тель, CAS номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
Гидроксиипро-нидазол | Sigma-Aldrich, 1156508-86-9 | C7H11N3O3 | [M+H]+ | 2.4 | 186.0873 | 1.0 | 0.9/1.0 | +1/+26 |
Ронидазол | Sigma-Aldrich, 7681-76-7 | C6H8N4O4 | [M+H]+ | 0.8 | 201.0618 | 1.0 | 3.5/3.2 | +4/+60 |
Тернидазол | Sigma-Aldrich, 70028-95-4 | C8H11N3O3 | [M+H]+ | 1.0 | 186.0873 | 0.5 | 0.7/0.6 | +6/+35 |
Тинидазол | Sigma-Aldrich, 19387-91-8 | C8H13N3O4S | [M+H]+ | 1.5 | 248.0699 | 0.5 | 0.6/0.6 | +8/+45 |
Гидроксиметил-метилнитроими-дазол | Sigma-Aldrich, 936-05-0 | C5H7N3O3 | [M+H]+ | 0.7 | 158.0560 | 1.0 | 2.9/2.7 | –3/–24 |
Секнидазол | Sigma-Aldrich, 3366-95-8 | C8H11О3N3 | [M+H]+ | 1.5 | 186.0873 | 0.5 | 0.6/0.5 | –3/–64 |
Метронидазол-OH | Witega, 4812-40-2 | C6H9N3O4 | [M+H]+ | 0.6 | 188.0666 | 1.0 | 0.8/0.7 | –14/–48 |
Ипронидазол-D3 | Witega, 1015855-83-0 | C7H8D3N3O2 | [M+H]+ | 3.3 | 173.1112 | 1.0 | +5/+32 | |
Сульфаниламиды и диаминопиримидины (22) | ||||||||
Сульфапиридин | Sigma-Aldrich, 144-83-2 | C11H11N3O2S | [M+H]+ | 1.4 | 250.0644 | 0.5 | 0.6/0.5 | –2/–55 |
Сульфадиазин | Fluka, 68-35-9 | C10H10N4O2S | [M+H]+ | 1.3 | 251.0597 | 1.0 | 1.6/1.4 | +5/–67 |
Сульфатиазол | Sigma-Aldrich, 72-14-0 | C9H9N3O2S2 | [M+H]+ | 1.2 | 256.0208 | 0.5 | 1.8/1.5 | +4/–65 |
Сульфамеразин | Sigma-Aldrich, 127-79-7 | C11H12N4O2S | [M+H]+ | 1.6 | 265.0753 | 0.5 | 0.7/0.6 | –4/–62 |
Сульфаметазин | Sigma-Aldrich, 57-68-1 | C12H14N4O2S | [M+H]+ | 2.7 | 279.0910 | 0.5 | 0.5/0.4 | –15/–67 |
Сульфахлорпи-ридазин | USP, 80-32-0 | C10H9ClN4O2S | [M+H]+ | 3.2 | 285.0207 | 1.0 | 3.2/3.0 | –6/–70 |
Сульфахинокса-лин | Sigma-Aldrich, 59-40-5 | C14H12N4O2S | [M+H]+ | 3.9 | 301.0753 | 1.0 | 3.0/3.0 | –7/–65 |
Сульфаэток-сипиридазин | Sigma-Aldrich, 963-14-4 | C12H14N4O3S | [M+H]+ | 3.7 | 295.0859 | 0.5 | 1.0/0.9 | –4/–68 |
Сульфагу- анидин | Sigma-Aldrich, 57-67-0 | C7H10N4O2S | [M+H]+ | 0.5 | 215.0597 | 1.0 | 2.2/2.1 | +4/–65 |
Сульфамето-ксазол | Sigma-Aldrich, 723-46-6 | C10H11N3O3S | [M+H]+ | 3.4 | 254.0594 | 5.0 | 2.7/2.5 | –12/–65 |
Сульфаметокси-пиридазин | Sigma-Aldrich, 80-35-3 | C11H12N4O3S | [M+H]+ | 3.2 | 281.0703 | 0.5 | 1.2/1.3 | –35/–58 |
Сульфамоксол | Sigma-Aldrich, 729-99-7 | C11H13N3O3S | [M+H]+ | 2.6 | 268.0750 | 0.5 | 0.9/1.2 | –19/–64 |
Сульфадиметок-син | Sigma-Aldrich, 122-11-2 | C12H14N4O4S | [M+H]+ | 3.9 | 311.0808 | 0.5 | 1.2/1.4 | –11/–73 |
Триметоприм | Sigma-Aldrich, 738-70-5 | C14H18N4O3 | [M+H]+ | 2.9 | 291.1452 | 0.5 | 0.7/0.9 | –34/–64 |
Баквилоприм | Sigma-Aldrich, 102280-35-3 | C17H20N6 | [M+H]+ | 0.6 | 309.1822 | 0.5 | 0.6/0.7 | +3/–57 |
Сульфаметизол | Sigma-Aldrich, 144-82-1 | C9H10N4O2S2 | [M+H]+ | 2.5 | 271.0318 | 1.0 | 0.5/0.8 | –27/–58 |
Анатлит | Производи-тель, CAS номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
Сульфаметер | Sigma-Aldrich, 63-74-1 | C11H12N4O3S | [M+H]+ | 2.9 | 281.0703 | 0.5 | 0.6/0.7 | –5/–61 |
Сульфамономе-токсин | Sigma-Aldrich, 1220-83-3 | C11H12N4O3S | [M+H]+ | 3.2 | 281.0703 | 0.5 | 0.4/0.5 | +10/–30 |
Сульфасалазин | Sigma-Aldrich, 599-79-1 | C18H14N4O5S | [M+H]+ | 4.0 | 399.0758 | 1.0 | 0.9/0/9 | –11/–75 |
Сульфафеназол | Dr.Ehrenstorfer, 526-08-9 | C11H14N4O2S | [M+H]+ | 3.8 | 315.0910 | 0.5 | 0.6/0.7 | +4/–38 |
Сульфисоксазол | TRC, 127-69-5 | C11H13N3O3S | [M+H]+ | 2.6 | 268.0750 | 0.5 | 0.6/0.8 | +3/–26 |
Сульфанитран | Dr.Ehrenstorfer, 122-16-7 | C14H13N3O5S | [M–H]– | 4.7 | 334.0492 | 1.0 | 0.5/0.7 | –5/–47 |
Сульфатиазол-D4 | Sigma-Aldrich, 72-14-0 | C9H5D4N3O2S2 | [M+H]+ | 1.2 | 260.0460 | 0.5 | +6/–65 | |
Плевромутилины (2) | ||||||||
Валнемулин | Sigma-Aldrich, 133868-46-9 | C31H52N2O5S | [M+H]+ | 4.4 | 565.3670 | 0.5 | 0.9/0.9 | –38/–87 |
Валнемулин-D6 | TRC, 1217627-44-5 | C31H46 D6N2O5S | [M+H]+ | 4.4 | 571.6321 | –38/–80 | ||
Тетрациклины (13) | ||||||||
4-Эпитетра- циклин | Acros organics, 23313-80-6 | C22H24N2O8 | [М+Н]+ | 1.4 | 445.1605 | 1.0 | 0.9/0.9 | –6/–78 |
4-Эпианги- дротетрациклин | EPRS, 4465-65-0 | C22H22N2O7 | [М+Н]+ | 3.6 | 427.1499 | 1.0 | 0.9/0.9 | –10/–68 |
4-Эпидемекло- циклин | LGC, 179471-95-5 | C21H21ClN2O8 | [М+Н]+ | 2.2 | 465.1059 | 1.0 | 1.1/1.0 | –10/–71 |
4-Эпидоксицик-лин | TRC, 6543-77-7 | C22H24N2O8 | [М+Н]+ | 3.3 | 445.1605 | 2.0 | 1.2/1.2 | –31/–77 |
4-Эпиметациклин | TRC, 6543-87-8 | C22H22N2O8 | [М+Н]+ | 2.5 | 443.1448 | 1.0 | 1.0/1.0 | –16/–70 |
4-Эпиокситетра-циклин | Acros organics, 35259-39-3 | С22Н24N2O9 | [М+Н]+ | 1.8 | 461.1554 | 1.0 | 1.1/1.0 | –16/–76 |
4-Эпихлортетра-циклин | Acros organics, 14297-93-9 | C₂₂H₂₃ClN₂O₈ | [М+Н]+ | 3.2 | 479.1215 | 1.0 | 1.3/1.5 | –31/–76 |
Ангидротетрацик-лин | TRC, 13803-65-1 | C22H22N2O7 | [М+Н]+ | 3.8 | 427.1499 | 1.0 | 0.9/1.2 | –10/–68 |
Демеклоциклин | Sigma-Aldrich, 64-73-3 | C21H21 ClN2O8 | [М+Н]+ | 3.2 | 465.1059 | 1.0 | 1.1/1.3 | –16/–76 |
Доксициклин | BePure, 24390-14-5 | C22H24N2O8 | [М+Н]+ | 3.5 | 445.1605 | 1.0 | 1.2/1.5 | –32/–82 |
Окситетрациклин | Sigma-Alrdich, 2058-46-0 | С22Н24N2O9 | [М+Н]+ | 2.3 | 461.1554 | 1.0 | 1.1/1.3 | –16/–76 |
Тетрациклин | Sigma-Aldrich, 60-54-8 | C22H24N2O8 | [М+Н]+ | 2.7 | 445.1605 | 1.0 | 0.9/0.9 | –6/–78 |
Хлортетрациклин | Sigma-Alrdich, 64-72-2 | C₂₂H₂₃ClN₂O₈ | [М+Н]+ | 3.4 | 479.1215 | 1.0 | 1.3/1.1 | –30/–70 |
Метациклин | TRC, 3963-95-9 | C22H22N2O8 | [М+Н]+ | 3.5 | 443.1448 | 1.0 | –16/–70 | |
Красители (7) | ||||||||
Бриллиантовый зеленый | Sigma-Aldrich, 633-03-4 | С27H33N2 | [M]+ | 5.3 | 385.2638 | 0.5 | 0.9/0.8 | –25/–45 |
Кристаллический фиолетовый | Sigma-Aldrich, 548-62-9 | С25H30N3 | [M]+ | 5.0 | 372.2434 | 0.5 | 1.0/0.9 | –30/–45 |
Анатлит | Производи-тель, CAS номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
Лейкомалахито-вый зеленый | Dr.Ehrenstorfer, 129-73-7 | С23H26N2 | [M+H]+ | 4.5 | 331.2187 | 0.5 | 6.3/6.0 | –31/–50 |
Лейкокристал-лический фиолетовый | Sigma-Aldrich, 603-48-5 | С25H31N3 | [M+H]+ | 4.0 | 374.2591 | 0.5 | 17/15 | –3/–41 |
Малахитовый зеленый | Dr.Ehrenstorfer, 2437-29-8 | С23H25N2 | [M]+ | 4.8 | 329.2012 | 0.1 | 0.9/0.8 | –30/–55 |
Акрифлавин | Sigma-Aldrich, 8048-52-0 | С14H14N3 С13H11N3 | [M]+ [M+H]+ | 3.8 3.7 | 224.1182 210.1026 | 1.0 | 2.0/1.9 | –25/–40 |
Метиленовый синий | Sigma-Aldrich, 122965-43-9 | С16Н18N3S | [M]+ | 3.9 | 284.1216 | 0.5 | 1.8/1.9 | –3/–35 |
Кристаллический фиолетовый-D6 | Witega, 612-204-00-2 | С25H24D6N3 | [M]+ | 5.0 | 378.2811 | 0.5 | –30/–45 | |
Хинолоны (17) | ||||||||
Данофлоксацин | TRC, 119478-55-6 | C19H20FN3O3 | [M+H]+ | 3.4 | 358.1561 | 0.1 | 0.7/0.6 | –5/–63 |
Дифлоксацин | Sigma-Aldrich, 91296-86-5 | C21H19F2N3O3 | [M+H]+ | 3.5 | 400.1467 | 0.1 | 1.4/1.8 | –45/–78 |
Левофлоксацин | TRC, 100986-85-4 | C18H20FN3O4 | [M+H]+ | 3.2 | 362.1510 | 0.1 | 0.6/0.7 | –5/–63 |
Ломефлоксацин | Sigma-Aldrich, 98079-52-8 | C17H19F2N3O3 | [M+H]+ | 3.3 | 352.1467 | 0.1 | 0.6/0.7 | –15/–70 |
Марбофлоксацин | Sigma-Aldrich, 115550-35-1 | C17H19FN4O4 | [M+H]+ | 2.9 | 363.1463 | 0.1 | 0.5/0.4 | –6/–67 |
Налидиксовая кислота | LGC, 389-08-2 | C12H12N2O3 | [M+H]+ | 4.1 | 233.0920 | 1.0 | 1.1/1.0 | –6/–72 |
Норфлоксацин | Sigma-Aldrich, 70458-96-7 | C16H18FN3O3 | [M+H]+ | 3.1 | 320.1404 | 0.1 | 1.0/0.9 | –5/–53 |
Оксолиновая кислота | Sigma-Aldrich, 14698-29-4 | C13H11NO5 | [M+H]+ | 3.8 | 262.0709 | 1.0 | 1.8/1.5 | –10/–73 |
Офлоксацин | Sigma-Aldrich, 82419-36-1 | C18H20FN3O4 | [M+H]+ | 3.2 | 362.1510 | 0.1 | 0.6/0.5 | –38/–80 |
Пефлоксацин | TRC, 70458-92-3 | C17H20FN3O3 | [M+H]+ | 3.2 | 334.1561 | 0.1 | 0.5/0.5 | –5/–60 |
Пипемидовая кислота | Sigma-Aldrich, 51940-44-4 | C14H17N5O3 | [M+H]+ | 1.8 | 304.1399 | 0.5 | 1.2/1.3 | –3/–74 |
Сарафлоксацин | Sigma-Aldrich, 91296-87-6 | C20H17F2N3O3 | [M+H]+ | 3.5 | 386.1310 | 0.5 | 2.2/2.3 | –70/-80 |
Спарфлоксацин | TRC, 110871-86-8 | C19H22F2N4O3 | [M+H]+ | 3.6 | 393.1733 | 0.1 | 0.8/0.8 | –11/–63 |
Флумеквин | Dr.Ehrenstorfer, 42835-25-6 | C14H12FNO3 | [M+H]+ | 4.1 | 262.0873 | 1.0 | 0.8/0.9 | –31/–83 |
Ципрофлоксацин | Sigma-Aldrich, 85721-33-1 | C17H18FN3O3 | [M+H]+ | 3.2 | 332.1404 | 0.5 | 1.1/1.3 | –3/–60 |
Эноксацин | TRC, 74011-58-8 | C15H17FN4O3 | [M+H]+ | 3.0 | 321.1357 | 0.1 | 0.6/0.7 | –4/–58 |
Энрофлоксацин | Sigma-Aldrich, 93106-60-6 | C19H22FN3O3 | [M+H]+ | 3.4 | 360.1717 | 0.1 | 0.7/0.7 | –25/–66 |
Энрофло- ксацин-D5 | Sigma-Aldrich, 1173021-92-5 | C19H17D5FN3O3 | [M+H]+ | 3.4 | З65.2032 | 0.1 | –25/–63 | |
Анатлит | Производи-тель, CAS номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
Цефалоспорины (20) | ||||||||
Дезацетил цефапирин | TRC, 104557-24-6 | C15H15N3O5S2 | [M+H]+ | 0.9 | 382.0526 | 5.0 | 1.2/1.4 | –13/–68 |
Цефадроксил | Sigma-Aldrich, 50370-12-2 | C16H17N3O5S | [M+Na]+ | 1.3 | 386.0781 | 5.0 | 15/18 | –15/–76 |
Цефаклор | EDQM, 53994-73-3 | C15H14ClN3O4S | [M+H]+ | 2.9 | 368.0466 | 5.0 | 6.5/6.8 | –3/–80 |
Цефалексин | Sigma-Aldrich, 15686-71-2 | C16H17N3O4S | [M+H]+ [M+Na]+ | 3.5 | 348.1013 370.0831 | 1.0 | 4.6/4.9 | –23/–69 |
Цефалоним | TRC, 5575-21-3 | C20H18N4O5S2 | [M+H]+ | 3.3 | 459.0791 | 10.0 | 17/19 | –16/–70 |
Цефапирин | Sigma-Aldrich, 24356-60-3 | C17H17N3O6S2 | [M+H]+ | 2.6 | 424.0631 | 0.5 | 0.9/0.8 | –3/–61 |
Цефацетрил | TRC, 10206-21-0 | C13H13N3O6S | [M+Na]+ | 3.0 | 362.0417 | 0.8 | 17/16 | –10/–58 |
Цефепим | Santa Cruz Biotechnology, 88040-23-7 | C19H24N6O5S2 | [M+H]+ | 1.2 | 481.1322 | 1.0 | 1.8/1.9 | –7/–78 |
Цефетамет пивоксил | Santa Cruz Biotechnology, 65243-33-6 | C20H25N5O7S2 | [M+H]+ | 4.7 | 512.1268 | 1.0 | 0.7/0.8 | –9/–66 |
Цефкином | Sigma-Aldrich, 118443-89-3 | C23H24N6O5S2 | [M+H]+ | 3.5 | 529.1322 | 1.0 | 7.6/7.7 | –10/–67 |
Цефоперазон | EDQM, 113826-44-1 | C25H27N9O8S2 | [M+Na]+ | 4.0 | 668.1316 | 5.0 | 6.3/6.0 | –11/–77 |
Цефотиам | Sigma-Aldrich, 66309-69-1 | C18H23N9O4S3 | [M+H]+ [M+Na]+ | 1.0 | 526.1108 548.0927 | 3.0 | 4.4/4.8 | –12/–65 |
Цефотаксим | USP, 64485-93-4 | C16H17N5O7S2 | [M+H]+ | 3.7 | 456.0642 | 1.0 | 1.6/1.8 | –13/–72 |
Цефпиром | TRC, 98753-19-6 | C22H22N6O5S2 | [M+H]+ | 3.3 | 515.1166 | 3.0 | 4.0/4.6 | –10/–88 |
Цефподоксим проксетил | Sigma-Aldrich, 80210-62-4 | C21H27N5O9S2 | [M+H]+ | 4.7 | 558.1322 | 5.0 | 1.0/1.5 | –17/–70 |
Цефтибутен | Sigma-Aldrich, 97519-39-6 | C15H14N4O6S2 | [M+H]+ | 2.0 | 411.0428 | 5.0 | 3.4/3.5 | –15/–63 |
Цефтиофур | Fluka, 103980-44-5 | C19H17N5O7S3 | [M+H]+ | 4.2 | 524.0363 | 5.0 | 1.7/1.9 | –3/–64 |
Десфуроил цефтиофур | Santa Cruz Biotechnology, 120882-22-6 | C14H15N5O5S3 | [M+H]+ | 3.8 | 430.0308 | 3.0 | 2.4/2.8 | –19/–78 |
Десфуроил цефтиофур цистеин дисульфид | TRC, 158039-15-7 | C17H20N6O7S4 | [M+H]+ | 2.9 | 549.0349 | 5.0 | 3.9/3.5 | –10/–69 |
Цефуроксим | TRC, 55268-75-2 | C16H16N4O8S | [M–H]– | 3.9 | 423.0605 | 10.0 | 4.8/4.2 | –15/–65 |
Цефетамет-D3 | TRC, 65052-63-3 | C15H12D3N4O6S2 | [M+H]+ | 3.6 | 401.0776 | 1.0 | –9/–66 | |
Кокцидиостатики (16) | ||||||||
Ампролиум | Sigma-Aldrich, 137-88-2 | C14H18N4 | [M+H]+ | 0.4 | 243.1604 | 0.5 | 1.5/1.8 | –25/–38 |
Анатлит | Производи-тель, CAS номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
Декоквинат | Sigma-Aldrich, 18507-89-6 | С24H35NO5 | [M+H]+ | 5.7 | 418.2588 | 0.5 | 0.1/0.2 | –2/–68 |
Диклазурил | Sigma-Aldrich, 101831-37-2 | C17H9Cl3N4O2 | [M–H]– | 5.7 | 404.9707 | 1.0 | 66/69 | –5/–35 |
Толтразурил | Fluka, 69004-03-1 | C18H14F3N3O4S | [M–H]– | 5.9 | 424.0573 | 3.0 | 49/67 | –16/–61 |
Толтразурила сульфон | Witega, 69004-04-2 | C18H14F3N3O6S | [M–H]– | 5.6 | 456.0472 | 3.0 | 18/75 | –13/–39 |
Клопидол | Fluka, 2971-90-6 | С7Н7Cl2NO | [M+H]+ | 1.0 | 191.9978 | 0.5 | 0.3/0.5 | –2/–50 |
Ласалоцид | Santa Cruz Biotechnology, 25999-20-6 | С34H54O8 | [M+Na]+ | 6.6 | 613.3711 | 0.5 | 0.2/0.4 | –2/–31 |
Мадурамицин | TRC, 84878-61-5 | C47H83O17N | [M+H]+ | 6.7 | 934.5734 | 0.5 | 0.2/0.2 | –2/–25 |
Монензин | Sigma-Aldrich, 22373-78-0 | C36H62O11 | [M+Na]+ | 6.5 | 693.4184 | 0.5 | 0.1/0.1 | –2/37 |
Наразин | TRC, 55134-13-9 | С43Н72О11 | [M+Na]+ | 6.9 | 787.4972 | 0.5 | 0.2/0.2 | –3/–38 |
4,4 Динитрока-рбанилид | Sigma-Aldrich, 330-95-0 | С13Н10N4O5 | [M–H]– | 5.5 | 301.0567 | 1.0 | 8.5/8.0 | –20/–30 |
Априноцид | TRC, 55779-18-5 | C12H9Сl FN5 | [M+H]+ | 3.6 | 278.0603 | 1.0 | 0.2/0.2 | –15/–58 |
Галофугинон | Sigma-Aldrich, 64924-67-0 | C16H17 BrСlN3O3 | [M+H]+ | 3.8 | 416.0193 | 1.0 | 0.5/0.5 | –11/–40 |
Робенидин | Sigma-Aldrich, 25875-50-7 | C15H13Сl2N5 | [M+H]+ | 4.5 | 334.0621 | 1.0 | 0.1/0.1 | –25/–58 |
Салиномицин | Sigma-Aldrich, 55721-31-8 | C42H70O11 | [M+Na]+ | 6.7 | 773.4810 | 0.5 | 0.2/0.2 | –3/–32 |
Этопабат | LGC, 59-06-3 | C12H15O4N | [M+H]+ | 3.9 | 238.1074 | 1.0 | 2.2/1.9 | –2/–48 |
4,4 Динитро-карбанилид-D8 | Witega, 1156508-87-0 | С13Н2D8N4O5 | [M–H]– | 5.3 | 309.1069 | 1.0 | –20/–30 | |
β-Агонисты (18) | ||||||||
Бромбутерол | Sigma-Aldrich, 21912-49-2 | C12H18Br2N2O | [M+H]+ | 4.7 | 366.9839 | 1.0 | 0.8/0.8 | –5/–75 |
Гидроксиметил- кленбутерол | Sigma-Aldrich, 37162-89-3 | C12H18Cl2N2O2 | [M+H]+ | 4.6 | 293.0818 | 1.0 | 0.6/0.7 | –20/–66 |
Зилпатерол | Witega, 119520-06-8 | C14H19N3O2 | [M+H]+ | 5.0 | 262.1550 | 1.0 | 0.7/0.7 | –6/–71 |
Изоксисуприн | Sigma-Aldrich, 579-56-6 | C18H23NO3 | [M+H]+ | 4.3 | 302.1751 | 1.0 | 0.5/0.6 | –14/–71 |
Кленбутерол | EDQM, 21898-19-1 | C12H18Cl2N2O | [M+H]+ | 4.6 | 277.0869 | 1.0 | 1.1/1.0 | –25/–37 |
Кленпентерол | Sigma-Aldrich, 37158-47-7 | C13H20Cl2N2O | [M+H]+ | 4.8 | 291.1025 | 0.5 | 0.5/0.6 | –14/–72 |
Кленпроперол | Witega, 38339-11-6 | C11H16Cl2N2O | [M+H]+ | 4.9 | 263.0712 | 0.5 | 1.0/0.9 | –2/–72 |
Мабутерол | Fluka, 54240-36-7 | C13H18ClF3N2O | [M+H]+ | 4.9 | 311.1133 | 0.5 | 0.6/0.7 | –7/–63 |
Анатлит | Производи-тель, CAS номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
Мапентерол | TRC, 54238-51-6 | C14H20ClF3N2O | [M+H]+ | 5.0 | 325.1289 | 0.5 | 0.9/0.9 | –12/–68 |
Рактопамин | TRC, 90274-24-1 | C18H23NO3 | [M+H]+ | 4.3 | 302.1751 | 1.0 | 0.5/0.6 | –5/–68 |
Ритодрин | TRC, 23239-51-2 | C17H21NO3 | [M+H]+ | 3.6 | 288.1594 | 1.0 | 0.2/0.2 | –5/–70 |
Сальбутамол | Britich Pharmacopoeia Chemical Reference Substance, 18559-94-9 | C13H21NO3 | [M+H]+ | 0.8 | 240.1594 | 5.0 | 0.5/0.4 | –3/–13 |
Тербуталин | Sigma-Aldrich, 23031-32-5 | C12H19NO3 | [M+H]+ | 4.3 | 226.1438 | 1.0 | 0.4/0.5 | –8/–68 |
Тулобутерол | TRC, 56776-01-3 | C12H18ClNO | [M+H]+ | 4.6 | 228.1150 | 1.0 | 0.7/1.0 | –3/–16 |
Фенотерол | TRC, 1944-12-3 | C17H21NO4 | [M+H]+ | 3.2 | 304.1543 | 5.0 | 0.4/0.3 | –5/–75 |
Циматерол | Fluka, 54239-37-1 | C12H17N3O | [M+H]+ | 0.8 | 220.1444 | 5.0 | 1.4/1.3 | –3/–71 |
Цимбутерол | Fluka, 54239-39-3 | C13H19N3O | [M+H]+ | 1.4 | 234.1601 | 1.0 | 0.4/0.3 | –6/–19 |
Ксилазин | Sigma-Aldrich, 23076-35-9 | C12H16N2S | [M+H]+ | 4.5 | 221.1107 | 0.5 | 0.6/0.4 | –8/–67 |
Кленбутерол-D9 | Witega, 184006-60-8 | C12H9D9Cl2N2O | [M+H]+ | 4.6 | 286.1434 | 1.0 | –25/–38 | |
Антигельминтики (37) | ||||||||
Aльбендазол | Sigma-Aldrich, 54965-21-8 | C12H15N3O2S | [M+H]+ | 4.0 | 266.0958 | 0.5 | 0.3/0.3 | –21/–49 |
Альбендазола сульфон | TRC, 75184-71-3 | C12H15N3O4S | [M+H]+ | 3.6 | 298.0851 | 0.5 | 1.7/1.6 | –20/–50 |
Аминофлубен-дазол | Witega, 82050-13-3 | C14H10FN3O | [M+H]+ | 3.7 | 256.0881 | 0.5 | 1.0/0.9 | –12/–50 |
Кетотриклабен-дазол | HPC standards GmbH, 1201920-88-8 | C13H7Cl3N2O2 | [M–H]– | 5.5 | 326.9489 | 5.0 | 19/16 | –10/–44 |
Клорсулон | TRC, 60200-06-8 | C8H8Cl3N3O4S2 | [M–H]– | 4.0 | 377.8944 | 1.0 | 4.3/4.0 | –20/–54 |
Левамизол | Sigma-Aldrich, 16595-80-5 | C11H12N2S | [M+H]+ | 1.0 | 205.0794 | 0.1 | 0.1/0.2 | –8/–61 |
Мебендазол | Fluka, 31431-39-7 | C16H13N3O3 | [M+H]+ | 4.0 | 296.1029 | 0.5 | 0.9/0.8 | –2/–70 |
Морантел | Sigma-Aldrich, 26155-31-7 | C12H16N2S | [M+H]+ | 3.4 | 221.1107 | 0.5 | 0.3/0.3 | –5/–49 |
Пириметамин | Dr.Ehrenstorfer, 58-14-0 | C12H13ClN4 | [M+H]+ | 3.7 | 249.0902 | 0.5 | 0.4/0.4 | –4/–56 |
Празиквантел | Sigma-Aldrich, 55268-74-1 | C19H24N2O2 | [M+H]+ | 4.6 | 313.1910 | 2.0 | 1.3/1.2 | –1/–48 |
Тиабендазол | Sigma-Aldrich, 148-79-8 | С10Н7N3S | [M+H]+ | 1.2 | 202.0433 | 0.5 | 0.2/0.2 | –2/–71 |
Триклабендазол | TRC, 68786-66-3 | С14Н9Cl3N2OS | [M+H]+ | 5.2 | 358.9574 | 1.0 | 1.0/0.9 | –9/–50 |
Анатлит | Производи-тель, CAS номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
Фенбендазол | Sigma-Aldrich, 43210-67-9 | C15H13N3O2S | [M+H]+ | 4.3 | 300.0806 | 0.5 | 0.4/0.3 | –4/–51 |
Фебантел | Sigma, 58306-30-2 | C20H22N4O6S | [M+H]+ | 4.9 | 447.1333 | 0.1 | 0.7/0.6 | –2/–44 |
Флубендазол | Dr.Ehrenstorfer, 31430-15-6 | C16H12N3O3F | [M+H]+ | 4.1 | 314.0941 | 0.5 | 1.8/1.9 | –6/–68 |
Оксибендазол | Dr.Ehrenstorfer, 20559-55-1 | C12H15N3O3 | [M+H]+ | 3.7 | 250.1191 | 0.5 | 4.0/4.4 | –9/–49 |
Альбендазол-2-аминосульфон | Sigma-Aldrich, 80983-34-2 | С10H13N3O2S | [M+H]+ | 1.2 | 240.0801 | 1.0 | 0.4/0.3 | –2/–47 |
Камбендазол | Dr.Ehrenstorfer, 26097-80-3 | С14H14N4O2S | [M+H]+ | 3.6 | 303.0910 | 1.0 | 0.5/0.5 | –7/–75 |
Клозантел | Sigma-Aldrich, 57808-65-8 | С22H14Cl2N2O2I2 | [M–H]- | 6.9 | 660.8438 | 0.5 | 0.4/0.4 | –12/–61 |
Клотримазол | TRC, 23593-75-1 | С22Н17ClN2 | [M+H]+ | 4.3 | 345.1153 | 1.0 | 30/25 | –10/–50 |
Аминомебен-дазол | Witega, 52329-60-9 | С14H11N3O | [M+H]+ | 3.6 | 238.0975 | 1.0 | 0.9/0.8 | –1/–47 |
Гидроксимебен-дазол | Witega, 60254-95-7 | С16H15N3O3 | [M+H]+ | 3.6 | 298.1186 | 1.0 | 1.1/1.0 | –8/–67 |
Никлозамид | Sigma-Aldrich, 73360-56-2 | С13H8Cl2N2O4 | [M–H]– | 5.9 | 324.9777 | 1.0 | 0.1/0.1 | –13/–76 |
Оксибендазола амин | Witega, 1538624-34-8 | С10H13N3O | [M+H]+ | 3.5 | 192.1131 | 1.0 | 0.7/0.7 | –1/–47 |
Оксиклозанид | Sigma-Aldrich, 2277-92-1 | С13Н6Cl5NO3 | [M–H]- | 5.9 | 399.8678 | 1.0 | 0.1/0.1 | –1/–49 |
Оксфендазола сульфон | Dr.Ehrenstorfer, 54029-20-8 | С15H13N3O4S | [M+H]+ | 3.9 | 332.0699 | 1.0 | 0.7/0.6 | –2/–54 |
Оксфендазол | Sigma-Aldrich, 53716-50-0 | С15H13N3O3S | [M+H]+ | 3.7 | 316.0750 | 1.0 | 1.3/1.4 | –6/–47 |
Парбендазол | Sigma-Aldrich, 14255-87-9 | С13H17N3O2 | [M+H]+ | 4.1 | 248.1394 | 1.0 | 0.6/0.5 | –15/–76 |
Пирантел | Sigma-Aldrich, 22204-24-6 | С11H14N2S | [M+H]+ | 2.1 | 207.0950 | 0.5 | 0.1/0.1 | –21/–80 |
Рафоксанид | Sigma-Aldrich, 22662-39-1 | С19H11Cl2NO3I2 | [M-H]- | 7.2 | 623.8121 | 1.0 | 0.2/0.2 | –26/–69 |
Гидрокситиабен-дазол | Witega, 948-71-0 | С10H7N3OS | [M+H]+ | 0.8 | 218.0383 | 1.0 | 0.3/0.3 | –31/–75 |
Триклабендазола сульфон | Witega, 106791-37-1 | С14Н9Cl3N2O3S | [M+H]+ | 4.9 | 390.9472 | 0.5 | 8.1/7.9 | –20/–48 |
Триклабендазола сульфоксид | Witega, 100648-13-3 | С14Н9Cl3N2O2S | [M+H]+ | 4.7 | 374.9523 | 0.5 | 4.1/4.5 | –41/–79 |
Аминотри- клабен-дазол | Sigma-Aldrich, 1448346-37-9 | С13Н8Cl3N3O | [M+H]+ | 4.3 | 327.9806 | 0.5 | 0.7/0.8 | –15/–73 |
Нитроксинил | Witega, 1689-89-0 | С7H3N2O3I | [M–H]– | 4.7 | 288.9105 | 0.5 | 0.1/0.1 | –2/–45 |
Нетобимин | TRC, 88254-99-3 | С14H20N4O7S2 | [M+H]+ | 3.9 | 421.0846 | 1.0 | 2.7/2.5 | –20/–65 |
Трикла-бендазол-D3 | Witega, 1353867-93-2 | С14H6D3N2OSCl3 | [M+H]+ [M–H]– | 5.1 5.9 | 361.9762 359.9606 | 1.0 1.0 | –8/–49 | |
Анатлит | Производи-тель, CAS номер | Брутто-формула | Ион | tR, мин | m/z | смин, мкг/кг | k, вода/ мат-рица | МЭ, % мин/макс |
Нестероидные противовоспалительные средства (19) | ||||||||
Антипирин | Sigma-Aldrich, 60-80-0 | C11H12N2O | [M+H]+ | 3.1 | 189.1017 | 0.5 | 0.5/0.4 | –28/–59 |
Аминоанти-пирин | Sigma-Aldrich, 83-07-8 | C11H13N3O | [M+H]+ | 1.0 | 204.1131 | 2.0 | 0.5/0.5 | –25/–60 |
Ацетиламино-антипирин | Sigma-Aldrich, 83-15-8 | C13H15N3O2 | [M+H]+ | 2.0 | 246.1237 | 2.0 | 0.5/0.4 | –21/–49 |
Диметиламиноан-типирин | Acros Organics, 58-15-1 | C13H17N3O | [M+H]+ | 1.0 | 232.1444 | 2.0 | 0.5/0.5 | –19/–50 |
Изопропилами-ноантипирин | TRC, 3615-24-5 | C14H19N3O | [M+H]+ | 1.9 | 246.1600 | 2.0 | 0.5/0.5 | –11/–60 |
Дапсон | Sigma-Aldrich, 80-08-0 | С12H12N2O2S | [M+H]+ | 2.4 | 249.0692 | 0.5 | 0.5/0.5 | –12/–36 |
Диклофенак | Sigma-Aldrich, 15307-79-6 | C14H11Cl2NO2 | [M–H]– | 5.6 | 294.0083 | 2.0 | 0.9/0.9 | –34/–58 |
Кетопрофен | Sigma-Aldrich, 22071-15-4 | C16H14O3 | [M–H]– | 5.1 | 253.0859 | 10.0 | 0.8/0.8 | –11/–46 |
Мелоксикам | LGC, 71125-38-7 | C14H13N3O4S2 C14H13N3O4S2 | [M+H]+ [M–H]– | 4.5 5.1 | 352.0420 350.0264 | 0.5 | 1.2/1.1 1.2/1.3 | –8/–63 |
Метиламиноанти-пирин | TRC, 519-98-2 | C12H15N3O | [M+H]+ | 0.9 | 218.1282 | 0.5 | 0.5/0.4 | –20/–60 |
Толфенамовая кислота | Sigma-Aldrich, 13710-19-5 | C14H12ClNO2 | [M–H]– | 6.0 | 260.0478 | 1.0 | 1.8/1.8 | –21/–80 |
Флуфенамовая кислота | Sigma-Aldrich, 530-78-9 | C14H10F3NO2 | [M–H]– | 5.9 | 280.0580 | 2.0 | 2.2/2.5 | –21/–80 |
Фенилбутазон | Sigma-Aldrich, 50-33-9 | C19H20N2O2 | [M–H]– | 5.8 | 307.1447 | 0.5 | 1.7/1.8 | –18/–70 |
Флуниксин | Sigma-Aldrich, 1015856-60-6 | C14H11N2O2F3 | [M+H]+ [M–H]– | 4.5 5.1 | 297.0845 295.0689 | 0.5 | 1.2/1.5 0.6/0.6 | –19/–52 |
Гидроксифлуник-син | Fluka, 75369-61-8 | C14H11N2O3F3 | [M+H]+ [M–H]– | 4.4 5.0 | 313.0795 311.0638 | 1.0 | 1.2/1.4 0.8/0.9 | –22/–46 |
Флурбипрофен | Pharmaffiates, 5104-49-4 | С15H13FO2 | [M+H]+ | 4.0 | 245.0972 | 1.0 | 1.2/1.4 | –10/–52 |
Нифлумовая кислота | TRC, 4394-00-7 | C13H9N2O2F3 | [M+H]+ [M–H]– | 4.9 5.6 | 283.0689 281.0532 | 5.0 | 1.2/1/2 1.4/1.4 | –35/–78 |
Мефенамовая кислота | Sigma-Aldrich, 61-68-7 | C15H15NO2 | [M+H]+ | 5.3 | 242.1176 | 5.0 | 5.6/5.3 | –21/–80 |
Рифампицин | TRC, 13292-46-1 | C43H58N4O12 | [M+H]+ | 4.7 | 823.4124 | 1.0 | 3.2/3.5 | –16/–51 |
Мелоксикам-D3 | Witega, 942047-63-4 | C14H10D3N3O4S2 | [M+H]+ [M–H]– | 4.4 5.1 | 355.0609 353.0452 | 0.5 | –9/–60 | |
Обозначения: АМОЗ – 3-амино-5-морфолинометил-1,3-оксазолидинон; АОЗ – 3-амино-2-оксазолидинон; АГД – 1-аминогидантоин; СЕМ – семикарбазид.
Использовали электрораспылительную ионизацию в устройстве ionBooster (Bruker Daltonics, Германия). Оптимальные значения параметров устройства: напряжение на щите капилляра 400 В, на капилляре 1 000 В, давление газа-распылителя азота 4.76 атм, поток газа-осушителя азота 6 л/мин, температура газа-осушителя азота 200 оC, поток газа-испарителя азота 250 л/ч, температура газа-испарителя азота 250 оC.
Диапазон регистрируемых масс ионов 100–1 100 Да. Для калибровки использовали 10 мМ раствор формиата натрия в смеси вода–изопропанол (1:1) в интервале хроматографирования 9.5–10 мин.
Пробы. Анализируемые пробы получены ФГБУ “Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов” (ФГБУ “ВГНКИ”) в рамках государственного ветеринарного лабораторного мониторинга, осуществляемого Россельхознадзором. Мясо, печень, почки, шпик хранили при –20 оC в холодильнике в течение месяца, перед анализом замороженные продукты измельчали с использованием бытового миксера; молоко, мёд, яйца хранили при 4 оC в течение месяца. Перед анализом яйца освобождали от скорлупы, объединяли 6 штук в одну пробу и тщательно перемешивали с использованием бытового миксера.
Идентификация и определение. Идентификацию ветеринарных препаратов по полученным хроматограммам проводили с использованием программного продукта DataAnalysis-4.1, TargetAnalysis (Bruker Daltonics, Германия), составление картины изотопного распределения аналитов – с использованием IsotopePattern (Bruker Daltonics, Германия).
Неизвестную концентрацию аналита в пробе определяли методом изотопного разбавления. В анализируемую пробу вводили смесь дейтерированных внутренних стандартов (5–10 нг/г, для тетрациклинов в качестве внутреннего стандарта использовали 50 нг/г метациклина), проводили анализ и концентрацию рассчитывали с использованием поправочных коэффициентов для каждого аналита (см. табл. 2):
сx = сдоб∙Sx∙k / Sв.ст.х,
где сдоб – концентрация добавки внутреннего стандарта, нг/г; Sx, Sв.ст.х – площади хроматографических пиков обнаруженного аналита в пробе и соответствующего данному классу аналитов внутреннего стандарта соответственно; k – поправочный коэффициент.
Поправочные коэффициенты рассчитывали предварительно на уровнях концентраций 1, 10, 20, 50 и 100 нг/мл по соотношениям площадей пиков стандартных растворов аналитов и внутренних стандартов (использовали среднее значение):
k = Sd / S0,
где Sd, S0 – площади хроматографических пиков внутреннего стандарта и аналита соответственно.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Оптимизация условий разделения. Выбор колонки осуществляли из следующих: 30×2.1 мм, 50×2.1 мм, 100×2.1 мм ACQUITY UPLC® BEN C18, 50×2.1 мм ACQUITY UPLC® Shield RP18, 50×2.1 мм ACQUITY UPLC® Phenyl (все с диаметром зернения 1.7 мкм) (Waters, США), 50×2.1 мм Acclaim™ 120 C18, диаметр зернения 2.2 мкм и 3.0 мкм (Thermo Scientific, США). Однако эффективность колонки ACQUITY UPLC® BEN C18 (30×2.1 мм, 1.7 мкм) оказалась несколько выше (число теоретических тарелок N = 8 759 для энрофлоксацина), чем у других (N = 5 346–7 863), селективность для всех колонок оказалась одинаковой. В дальнейших исследованиях использовали колонку 30×2.1 мм ACQUITY UPLC® BEN C18. Однако следует отметить, что использование любых из перечисленных колонок не приводило к существенному изменению основных аналитических характеристик методики.
При выборе подвижной фазы использовали воду, ацетонитрил и метанол без добавок и с добавками муравьиной кислоты и формиата аммония. В итоге установили оптимальный вариант: А – 0.1%-ный водный раствор муравьиной кислоты, Б – 0.1%-ный ацетонитрильный раствор муравьиной кислоты. Добавки формиата аммония и использование метанола в качестве подвижной фазы не привели к существенному увеличению хроматографических пиков исследуемых аналитов.
При выборе скорости потока подвижной фазы и градиента лучшие результаты получили при скорости 0.4 мл/мин и следующем градиенте: 0 мин – 5% Б, 0.5 мин – 5% Б, 2 мин – 50% Б, 5 мин – 100% Б, 6 мин – 5% Б, 10 мин – 5% Б.
Температуру термостата хроматографической колонки выбирали из 30, 40, 50 и 60 оC, инжектируемый объем пробы из 5, 10, 20, 50, 60 и 100 мкл. Установили, что для достижения высокой чувствительности определения следует использовать температуру хроматографической колонки 50 оC (при этом давление подвижной фазы в хроматографической колонке составило 160–170 бар) и оптимальный объем вводимой в инжектор пробы – 50 мкл (объем более 50 мкл приводил к искажению симметричности хроматографического пика).
Использование УВЭЖХ значительно сокращает время хроматографирования. В данной работе продолжительность разделения аналитов на колонке длиной 30 мм составила 8 мин. Общее время хроматографирования составило 10–12 мин с учетом кондиционирования колонки и времени калибровки по массам ионов.
Оптимизация пробоподготовки. Для пробоподготовки использовали экстракцию ацетонитрилом в нейтральной и кислой средах (с добавлением янтарной кислоты). В первом и во втором случаях добавляли ЭДТА для связывания ионов металлов в комплексы с целью предотвращения образования комплексов с аналитами. Варьирование различных параметров – массы навески пробы, количества высаливателя и экстрагента, природы высаливателя, количества ЭДТА, а также учет матричного эффекта позволил оптимизировать условия пробоподготовки. Кроме того, добавление метанола в экстракт после его упаривания способствовало образованию протонированных аддуктов пенициллинов с метанолом.
Ионы при электрораспылительной ионизации. Большинство рассматриваемых соединений образует протонированные аддукты либо депротонируются (табл. 2). Для некоторых классов соединений отмечали особенности. Так, приготовление стандартных растворов пенициллинов в метаноле и добавление метанола в экстракт пробы приводит к появлению положительно заряженных протонированных аддуктов пенициллинов с метанолом [M+CH3OH+H]+, использование которых в анализе позволило значительно увеличить чувствительность определения аналитов. Спирамицин и тулатромицин образуют двухзарядные ионы [M+2Н]2+, амфениколы – аддукты с хлором [M+Cl]–, цефадроксил, цефалексин, цефацетрил, цефаперазон, цефотиам, ласалоцид, наразин, монензин и салиномицин – аддукты с натрием [M+Na]+.
Матричный эффект. Для минимизации МЭ оптимизировали условия пробоподготовки без очистки методом твердофазной экстракции. Установили, что при данных условиях матричный эффект максимален для печени и мёда (>–80%), минимален для молока, мяса различных животных (>–40%). Матрица оказывает незначительное влияние в области времени удерживания исследуемых аналитов (0.5–2, 3–6 мин). Для нивелирования матричного эффекта применяли изотопно меченные стандарты и приём изотопного разбавления для определения концентрации аналитов.
Метод изотопного разбавления. В табл. 2 представлены аналитические характеристики, полученные при оценке остаточных содержаний 214 ветеринарных препаратов. Установили, что поправочный коэффициент k имеет практически одинаковые значения для водных растворов аналитов и экстрактов из различных матриц (молоко, мясо, субпродукты и пр.). Это позволило нам не использовать матричные градуировочные зависимости, а применить метод изотопного разбавления для расчета концентраций аналитов с учётом поправочного коэффициента (для каждого класса рассматриваемых соединений предложен один изотопно меченный стандарт) (табл. 2).
Идентификацию проводили по полученным масс-хроматограммам с помощью программного продукта Target-Analysis-1.3. Идентификационными параметрами служили времена удерживания (±0.1 мин), точность массы моноизотопа m/z (±5 млн–1) и совпадение картины изотопного распределения (mSigma <20). Погрешность в определении масс ионов не превышала 2 млн–1.
Анализ проб. В соответствии с разработанной методикой проводили скрининг проб пищевых продуктов на рассматриваемые аналиты. В случае выявления какого-либо соединения определяли его содержание расчётным способом, используя метод изотопного разбавления. В табл. 3 представлены некоторые результаты определения при выявлении остаточных количеств рассматриваемых соединений в пищевых продуктах. Как видно, полученные данные хорошо согласуются с результатами анализа по ГОСТ 34533-2019, 31694-2012, 34136-2017, 33486-2015, 32797-2014, 32014-2012, 34137-2017, 34535-2019, 32834-2014, 32881-2014 и МУ А-1/080. Следует отметить, что данный способ скрининга проб и оценки остаточных содержаний ветеринарных препаратов позволяет существенно сократить продолжительность (до 40–50 мин) и стоимость анализа.
* * *
Разработка УВЭЖХ-методик позволяет сократить продолжительность анализа, а при совмещении с МС/МС и МС-ВП разработать простые, недорогие методики, характеризующиеся высокой точностью. Метод ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения максимально подходит для решения повседневных задач, таких как скрининг проб и определение остаточных содержаний ветеринарных препаратов и их метаболитов в случае установления соответствия продукции законодательным требованиям. Рассмотрены упрощенная пробоподготовка и применение изотопного разбавления для оценки концентрации 214 аналитов. Исключены стадии твердофазной экстракции, матричной градуировки. Предложено для каждого класса соединений использовать один изотопно меченный стандарт. Установлено, что поправочный коэффициент не меняется при использовании водных растворов аналитов и аналитов, извлеченных из различных матриц. Для определения концентрации в пробу вводят изотопно меченные стандарты, проводят пробоподготовку и хроматографирование, в случае обнаружения какого-либо лекарственного средства концентрацию рассчитывают с учетом поправочного коэффициента. Предлагаемая методика не требует дополнительной очистки образцов и позволяет одновременно идентифицировать остаточные содержания 214 лекарственных препаратов для ветеринарного применения на уровне их предела обнаружения 0.1–10.0 нг/г. Продолжительность анализа проб не превышает 40–50 мин.
Таблица 3. Результаты анализа пищевых продуктов по разработанной методике и по ГОСТ (n = 3, Р = 0.95)
Матрица | Аналит | Найдено по разработанной методике, мкг/кг | sr | Найдено по ГОСТ, мкг/кг | sr |
Молоко № 1 | Цефтиофур | 5.4±0.1 | 0.08 | 4.9±0.2 | 0.09 |
Нафциллин | 9.7±0.2 | 0.05 | 9.9±0.1 | 0.04 | |
Молоко № 2 | Цефтиофур | 3.2±0.1 | 0.10 | 2.9±0.2 | 0.13 |
Нафциллин | 2.4±0.1 | 0.11 | 2.9±0.2 | 0.12 | |
Молоко № 3 | Цефтиофур | 9.6±0.2 | 0.08 | 9.9±0.3 | 0.09 |
Нафциллин | 0.30±0.08 | 0.11 | 0.35±0.06 | 0.12 | |
Говядина | Цефтиофур | 0.22±0.06 | 0.13 | 0.21±0.07 | 0.13 |
Нафциллин | 0.43±0.05 | 0.12 | 0.38±0.07 | 0.13 | |
Цефуроксим | 5.64±0.08 | 0.10 | 5.39±0.06 | 0.09 | |
Творог | Цефтиофур | 5.0±0.1 | 0.09 | 4.3±0.2 | 0.09 |
Нафциллин | 2.2±0.1 | 0.09 | 2.3±0.1 | 0.09 | |
Яйца куриные | Пиперациллин | 7.6±0.1 | 0.08 | 7.3±0.1 | 0.09 |
Цефтиофур | 5.8±0.1 | 0.09 | 5.6±0.1 | 0.09 | |
Мясо курицы | Цефотаксим | 40 ± 2 | 0.08 | 43±3 | 0.08 |
Мясо цыплёнка бройлера | Ципрофлоксацин | 43±5 | 0.02 | 49±3 | 0.02 |
Мясо курицы | Хлорамфеникол | 8.2±0.9 | 0.03 | 6.1±0.4 | 0.02 |
Колбаса | Окситетрациклин | 18±4 | 0.03 | 12±6 | 0.03 |
Доксициклин | 8.0±0.3 | 0.02 | 8.0±0.9 | 0.02 | |
Говядина | Хлорамфеникол | 20±6 | 0.01 | 17±4 | 0.02 |
Яйцо | Ципрофлоксацин | 18±2 | 0.02 | 16±5 | 0.02 |
Рыба | Энрофлоксацин | 84±7 | 0.03 | 90±6 | 0.03 |
Ципрофлоксацин | 5.4±0.6 | 0.02 | 4.1±0.8 | 0.02 |
About the authors
V. G. Amelin
Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов
Author for correspondence.
Email: amelinvg@mail.ru
Russian Federation, Звенигородское шоссе, 5, Москва, 123022
O. I. Lavrukhina
Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов
Email: amelinvg@mail.ru
Russian Federation, Звенигородское шоссе, 5, Москва, 123022
A. V. Tretyakov
Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов
Email: amelinvg@mail.ru
Russian Federation, Звенигородское шоссе, 5, Москва, 123022
I. V. Batov
Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов
Email: amelinvg@mail.ru
Russian Federation, Звенигородское шоссе, 5, Москва, 123022
L. K. Kish
Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов
Email: amelinvg@mail.ru
Russian Federation, Звенигородское шоссе, 5, Москва, 123022
References
- Jia W., Chu X., Chang J., Wang P.G., Chen Y., Zhang F. High-throughput untargeted screening of veterinary drug residues and metabolites in tilapia using high resolution orbitrap mass spectrometry // Anal. Chim. Acta. 2017. V. 957. P. 29.
- Regal P., Lamas A., Franco C.M., Cepeda A. Veterinary drugs: Progress in multiresidue technique / Encyclopedia of Food Chemistry / Eds. Melton L., Shahidi F., Varelis P. Academic Press, 2019. 2194 p.
- Frenich A.G., Romero-González R., del Mar Aguilera-Luiz M. Comprehensive analysis of toxics (pesticides, veterinary drugs and mycotoxins) in food by UHPLC–MS // Trends Anal. Chem. 2014. V. 63. P. 158.
- Лаврухина О.И., Амелин В.Г., Киш Л.К., Третьяков А.В., Пеньков Т.Д. Определение остаточных количеств антибиотиков в объектах окружающей среды и пищевых продуктах // Журн. аналит. химии. 2022. Т. 77. № 11. С. 969.
- Jia W., Liu Y., Xu X., Zhang Y., Shi L. Comprehensive multiplexed analysis of risky drugs in eggs based on magnetic zeolitic imidazolate frameworks and UHPLC Q-Orbitrap HRMS // J. Food Drug Anal. 2021. V. 29. № 3. Article 7.
- De Oliveira Arias J.L., Schneider A., Batista-Andrade J.A., Vieira A.A., Caldas S.S., Primel E.G. Chitosan from shrimp shells: A renewable sorbent applied to the clean-up step of the QuEChERS method in order to determine multi-residues of veterinary drugs in different types of milk // Food Chem. 2018. V. 240. P. 1243.
- Neely S., Martin J., da Cruz N.F., Piester G., Robinson M., Okoniewski R., Tran B.N. Application of dispersive solid phase extraction for trace analysis of toxic chemicals in foods // J. Chromatogr. B: Analyt. Technol. Biomed Life Sci. 2018. V. 1092. P. 65.
- Al Tamim A., Alzahrani S., Al-Subaie S., Almutairi M.A., Al Jaber A., Alowaifeer A.M. Fast simultaneous determination of 23 veterinary drug residues in fish, poultry, and red meat by liquid chromatography/tandem mass spectrometry // Arab. J. Chem. 2022. V. 15. № 10. Article 104116.
- Liu H., Lin T., Cheng X., Li N., Wang L., Li Q. Simultaneous determination of anabolic steroids and β-agonists in milk by QuEChERS and ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. B: Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 2017. V. 1043. P. 176.
- Imamoglu H., Oktem Olgun E. Analysis of veterinary drug and pesticide residues using the ethyl acetate multiclass/multiresidue method in milk by liquid chromatography-tandem mass spectrometry // J. Anal. Methods Chem. 2016. 2016. Article 2170165.
- Zhang L., Shi L., He Q., Li Y. A rapid multiclass method for antibiotic residues in goat dairy products by UPLC-quadrupole/electrostatic field orbitrap high-resolution mass spectrometry // J Anal. Sci. Technol. 2021. V. 12. 14.
- Мелехин А.О., Толмачева В.В., Шубина Е.Г., Дмитриенко С.Г., Апяри В.В., Грудев А.И. Применение сверхсшитого полистирола для многокомпонентной твердофазной экстракции остатков 63 ветеринарных препаратов при их определении в курином мясе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии–тандемной масс-спектрометрии // Журн. аналит. химии. 2021. Т. 76. № . 8. С. 708.
- Castilla-Fernández D., Moreno-González D., Beneito-Cambra M., Molina-Díaz A. Critical assessment of two sample treatment methods for multiresidue determination of veterinary drugs in milk by UHPLC–MS/MS // Anal. Bioanal. Chem. 2019. V. 411. P. 1433.
- Jia W., Chu X., Ling Y., Huang J., Chang J. High-throughput screening of pesticide and veterinary drug residues in baby food by liquid chromatography coupled to quadrupole Orbitrap mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2014. V. 1347. P. 122.
- Wang C., Li X., Yu F., Wang Y., Ye D., Hu X., Zhou L., Du J., Xia X. Multi-class analysis of veterinary drugs in eggs using dispersive-solid phase extraction and ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry // Food Chem. 2021. V. 334. Article 127598.
- Geis-Asteggiante L., Lehotay S.J., Lightfield A.R., Dutko T., Ng C., Bluhm L. Ruggedness testing and validation of a practical analytical method for >100 veterinary drug residues in bovine muscle by ultrahigh performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2012. V. 1258. P. 43.
- Desmarchelier A., Fan K., Minh Tien M., Savoy M.C., Tarres A., Fuger D., Goyon A., Bessaire T., Mottier P. Determination of 105 antibiotic, anti-inflammatory, antiparasitic agents and tranquilizers by LC–MS/MS based on an acidic QuEChERS-like extraction // Food Addit. Contam. Part A: Chem. Anal. Control Expo Risk Assess. 2018. V. 35. № 4. P. 646.
- Casey C.R., Andersen W.C., Williams N.T., Nickel T.J., Ayres P.R. Multiclass, multiresidue method for the quantification and confirmation of 112 veterinary drugs in game meat (bison, deer, elk, and rabbit) by rapid polarity switching liquid chromatography-tandem mass spectrometry // J. Agric. Food Chem. 2021. V. 69. № 4. P. 1175.
- Pérez-Ortega P., Lara-Ortega F.J., Gilbert-López B., Moreno-González D., García-Reyes J.F., Molina-Díaz A. Screening of over 600 pesticides, veterinary drugs, food-packaging contaminants, mycotoxins, and other chemicals in food by ultra-high performance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UHPLC-QTOFMS) // Food Anal. Methods. 2017. V. 10. P. 1216.
- Melekhin A.O., Tolmacheva V.V., Goncharov N.O., Apyari V.V., Dmitrienko S.G., Shubina E.G., Grudev A.I. Multi-class, multi-residue determination of 132 veterinary drugs in milk by magnetic solid-phase extraction based on magnetic hypercrosslinked polystyrene prior to their determination by high-performance liquid chromatography – tandem mass spectrometry // Food Chem. 2022. V. 387. Article 132866.
- Cao G., Zhan J., Shi X., Deng X., Zhu J., Wu W., Chen X. Analysis of 140 veterinary drugs and other contaminants in poultry muscle by ultrahigh-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry // Chromatographia. 2018. V. 81. P. 707.
- Li X., Chi Q., Xia S., Pan Y., Chen Y., Wang K. Untargeted multi-residue method for the simultaneous determination of 141 veterinary drugs and their metabolites in pork by high-performance liquid chromatography time-of-flight mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2020. V. 1634. Article 461671.
- Zhao W., Jiang R., Guo W., Li S., Wang J., Wang S., Li Y. Screening and analysis of multiclass veterinary drug residues in animal source foods using UPLC-Q-Exactive Orbitrap/MS // Bull. Environ. Contam. Toxicol. 2021. V. 107. P. 228.
- Wang J., Zhao W., Guo W., Li Y., Jiang R., Li H., Wang S., Li Z. Simultaneous screening and analysis of 155 veterinary drugs in livestock foods using ultra-high performance liquid chromatography tandem quadrupole linear-ion-trap mass spectrometry // Food Chem. 2022. V. 393. Article 133260.
- Pugajeva I., Ikkere L.E., Judjallo E., Bartkevics V. Determination of residues and metabolites of more than 140 pharmacologically active substances in meat by liquid chromatography coupled to high resolution Orbitrap mass spectrometry // J. Pharm. Biomed. Anal. 2019. V. 166. P. 252.
- Lehotay S.J. Comparison of analyte identification criteria and other aspects in triple quadrupole tandem mass spectrometry: Case study using UHPLC–MS/MS for regulatory analysis of veterinary drug residues in liquid and powdered eggs // Anal. Bioanal. Chem. 2022. V. 414. P. 287.
- Bai M., Tang R., Li G., She W., Chen G., Shen H., Zhu S., Zhang H., Wu H. High-throughput screening of 756 chemical contaminants in aquaculture products using liquid chromatography/quadrupole time-of-flight mass spectrometry // Food Chem: X. 2022. V. 15. Article 100380.
- Kong C., Wang Y., Huang Y. Multiclass screening of >200 pharmaceutical and other residues in aquatic foods by ultrahigh-performance liquid chromatography–quadrupole-Orbitrap mass spectrometry // Anal. Bioanal. Chem. 2018. V. 410. P. 5545.
- Zhan J., Shi X.-Z., Xu X.-W., Cao G.-Z., Chen X.-F. Generic and rapid determination of low molecular weight organic chemical contaminants in protein powder by using ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry // J. Chromatogr. В. 2020. V. 1138. Article 121967.
- Kuchař L., Asfaw B., Rybová J., Ledvinová J. Chapter five – Tandem mass spectrometry of sphingolipids: Applications for diagnosis of sphingolipidoses / Advances in Clinical Chemistry / Ed. Makowski G.S. Elsevier, 2016. V. 77. P. 177.
- Kaufmann A., Butcher P., Maden K., Widmer M. Quantitative multiresidue method for about 100 veterinary drugs in different meat matrices by sub 2-µm particulate high-performance liquid chromatography coupled to time of flight mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2008. V. 1194. P. 66.
- Stolker A.A.M., Rutgers P., Oosterink E., Lasaroms J.J.P., Petrs P.J.R., Rhijn J.A., Nielen M.W.F. Comprehensive screening and quantification of veterinary drugs in milk using UPLC-ToF-MS // Anal. Bioanal. Chem. 2008. V. 391. P. 2309.
- Ortelli D., Cognard E., Jan Ph., Edder P. Comprehensive fast multiresidue screening of 150 veterinary drugs in milk by ultra-performance liquid chromatography coupled to time of flight mass spectrometry // J. Chromatogr. B. 2009. V. 877. P. 2363.
- Peters R.J.B., Bolck Y.J.C., Rutgers P., Stolker A.A.M., Nielen M.W.F. Multi-residue screening of veterinary drugs in egg, fish and meat using high-resolution liquid chromatography accurate mass time-of-flight mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2009. V. 1216. P. 8206.
- Amelin V., Korotkov A., Andoralov A. Identification and determination of 492 contaminants of different classes in food and feed by high-resolution mass spectrometry using the standard addition method // J. AOAC Int. 2016. V. 99. № 6. P. 1600.
- Zhang Y., Li X., Liu X., Zhang J., Cao Y., Shi Z., Sun H. Multi-class, multi-residue analysis of trace veterinary drugs in milk by rapid screening and quantification using ultra-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry // J. Dairy. Sci. 2015. V. 98. P. 8433.
- Kaufmann A., Butcher P., Maden K., Walker S., Widmer M. Development of an improved high resolution mass spectrometry based multi-residue method for veterinary drugs in various food matrices // Anal. Chim. Acta. 2011. V. 700. P. 86.
- Gómez-Pérez M.L, Plaza-Bolaños P., Romero-González R., Martínez-Vidal J.L., Garrido-Frenich A. Comprehensive qualitative and quantitative determination of pesticides and veterinary drugs in honey using liquid chromatography-Orbitrap high resolution mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2012. V. 1248. P. 130.
- Stickle D.F., Garg U. Chapter 4 – Validation, quality control, and compliance practice for mass spectrometry assays in the clinical laboratory / Mass Spectrometry for the Clinical Laboratory / Eds. Nair H., Clarke W. Academic Press, 2017. P. 63.
- Goscinny S., Unterluggauer H., Aldrian J., Masselter S. Determination of glyphosate and its metabolite AMPA (aminomethylphosphonic acid) in cereals after derivatization by isotope dilution and UPLC–MS/MS // Food Anal. Methods. 2012. V. 5. P. 1177.
- Амелин В.Г., Большаков Д.С., Подколзин И.В. Быстрый скрининг и определение остаточных количеств β-лактамных антибиотиков в пищевых продуктах методом ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии–квадруполь-времяпролетной масс-спектрометрии высокого разрешения // Журн. аналит. химии. 2020. Т. 75. № 9. С. 806.
Supplementary files
