МОДЕЛИРОВАНИЕ ОЛИГОМЕРИЗАЦИИ И ФИБРИЛЛОГЕНЕЗ МУТАНТНЫХ ФОРМ БЕТА-2 МИКРОГЛОБУЛИНА

Для решения проблемы специфической терапии амилоидозов проведено исследование на модельном объекте — амилоидогенном белке бета2-микроглобулине (β2m) человека. Целью исследования было получение вариантов белка с заменами, модулирующими фибриллогенные свойства β2m, которые потенциально могли бы подавлять фибриллогенез природного белка. Исследование включало два этапа: компьютерное моделирование способности к ассоциации β2m при внесении аминокислотных замен в первичную структуру с изменением степени симметрии молекулы и экспериментальную проверку свойств отобранных вариантов белка путем создания соответствующих генетических конструкций и получения целевых рекомбинантных вариантов β2m. На основании компьютерных расчетов были отобраны варианты с двойными заменами в N- и C-концевых участках белковой молекулы, которые потенциально обеспечивают изменение агрегационных свойств мономеров. Эти варианты получены в виде рекомбинантных производных в ходе экспрессии специально созданных генетических конструкций. Для получения конструкции с заменами в средней части молекулы белка разработан оригинальный способ двойной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с получением промежуточного протяженного праймера — фрагмента гена β2m с целевыми заменами, который использовался в качестве прямого праймера во второй ПЦР. Показано, что все рекомбинантные варианты β2m способны образовывать фибриллы. Фибриллы формируются также при попарном смешении разных вариантов. Электронномикроскопически все фибриллы вариантов β2m не обнаруживают видимых отличий.

амилоидоз, бета2-микроглобулин, фибриллогенез