РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ ПЕПТИДНОГО АНТАГОНИСТА К РЕЦЕПТОРУ ОРЕКСИНОВ


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Цель исследования: синтез гена, кодирующего сконструированный ранее искусственный белок анторекс - антагонист рецептора орексина ОхR1, изучение его экспрессии в клетках Escherichia coli и разработка метода очистки данного белка из лизатов бактериальных клеток. Использовались методы химико-ферментативного синтеза ДНК, генетической инженерии, селекции и хроматографической очистки белков. Результаты: синтезирован ген, кодирующий белок анторекс, последовательно получены содержащая данный ген плазмидная ДНК рЕТ-antorex и штамм бактерий Escherichia coli BL21(pЕT-аntorex) - стабильный продуцент рекомбинантного белка анторекс, разработаны методы культивирования штамма-продуцента и хроматографической очистки белка анторекс с помощью обратнофазной и ионообменной хроматографии. Произведено культивирование полученного штамма-продуцента в ферментере объемом 10 литров. Наработана опытная партия белка анторекс массой 480 мг с чистотой 97,5%. Заключение: разработанные методы продукции искусственного белка анторекс в бактериальных клетках и его очистки позволяют нарабатывать данный белок для проведения доклинических и клинических испытаний.

Об авторах

И В Духовлинов

Институт экспериментальной медицины

Н А Климов

Институт экспериментальной медицины

Е А Федорова

Институт экспериментальной медицины

Ю В Жеребцова

Институт экспериментальной медицины

Е А Черняева

Институт экспериментальной медицины

А И Орлов

Институт экспериментальной медицины

Список литературы

  1. Sakurai Т. Reverse pharmacology of orexin: from an orphan GPCR to integrative physiology // Regulatory peptides. 2005. Vol. 126, No 1. Р. 3-10.
  2. DiLeone R.J., Georgescu D., Nestler E.J. Lateral hypothalamic neuropeptides in reward and drug addiction // Life Sci. 2003. Vol. 73, No 6. P. 759-768.
  3. Paneda C., Winsky-Sommerer R., Boutrel B., de Lecea L. The corticotropin-releasing factor hypocretin connection: implications in stress response and addiction // Drug News Perspect. 2005. Vol. 18, No 4. P. 250-255.
  4. Harris G.C., Wimmer M., Aston J.G. A role for lateral hypothalamic orexin neurons in reward seeking // Nature. 2005. Vol. 437, No 7058. P. 556-559.
  5. Borgland S.L., Taha S.A., Sarti F., Fields H.L., Bonci A. Orexin A in the VTA is critical for the induction of synaptic plasticity and behavioral sensitization to cocaine // Neuron. 2006. Vol. 49, No 4. P. 589-601.
  6. Pasumarthi R.K., Reznikov L.R., Fadel J. Activation of orexin neurons by acute nicotine // Eur. J. Pharmacol. 2006. Vol. 535, No 1-3. P. 172-176.
  7. Narita M., Nagumo Y., Hashimoto S., Narita M., Khotib J., Miyatake M., Sakurai T., Yanagisawa M., Nakamachi T., Shioda S., Suzuki T. Direct involvement of orexinergic systems in the activation of the mesolimbic dopamine pathway and related behaviors induced by morphine // J. of Neurosci. 2006. Vol. 26, No 2. P. 398-405.
  8. Majumder K. Ligation-free gene synthesis by PCR: synthesis and mutagenesis at multiple loci of a chimeric gene encoding OmpA signal peptide and hirudin // Gene. 1992. Vol. 110, No 1. P. 89-94.
  9. Laemmly U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 // Nature. 1970. Vol. 227. P. 680-685.
  10. Studier F.W. Stable expression clones and auto-induction for protein production in E. coli // Methods Mol Biol. 2014. Vol. 1091, No 1. P. 17-32.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Духовлинов И.В., Климов Н.А., Федорова Е.А., Жеребцова Ю.В., Черняева Е.А., Орлов А.И., 2017

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».