ИЗУЧЕНИЕ ПРОДУКЦИИ НЕТОКСИЧНОГО ВАРИАНТА ДИФТЕРИЙНОГО ТОКСИНА CRM197 В КЛЕТКАХ ESCHERICHIA COLI

Цели исследования: синтез гена, кодирующего нетоксичный вариант ди-терийного токсина CRM197, исследование его экспрессии в клетках Escherichia coli, получение штамма бактерий - продуцента рекомбинантного CRM197, разработка метода очистки данного белка из биомассы бактерий. Материалы и методы исследования. Ген белка CRM197 синтезировали химико--ерментативным методом. Конструирование и сборку экспрессионного вектора проводили стандартными методами генетической инженерии. Продукцию CRM197 клетками Escherichia coli изучали методами электро-ореза в полиакриламидном геле и иммуноблоттинга. Рекомбинантный CRM197 выделяли с помощью металлохелатной хроматогра--ии. Результаты. Применение экспрессионного вектора р^ПП позволило получить продукцию рекомбинантного белка при понижении температуры культивирования клеток с 37 до 16°С. Разработан метод очистки рекомбинантного CRM197, получен препарат белка с чистотой 97%, который имел молекул рную массу 60 кДа и связывался в иммуноблоте с поликлональными антителами к ди-терийному токсину. Заключение. Успешная продукция рекомбинантного белка CRM197 была достигнута с использованием вектора pColdll при пониженной температуре культивирования клеток. Очищенный белок обладает ну-клеазной активностью, что свидетельствует о его правильном -олдировании. Получение очищенного ре комбинантного CRM197 позволит использовать данный белок при конструировании конъюгатных вакцин.

дифтерийный токсин, промотор cspA, металлохелатная хроматография