Получение холодоадаптированных штаммов вируса гриппа A с модифицированным геном NS методом генной инженерии и оценка их свойств

Обоснование. Высокая изменчивость возбудителя вируса гриппа, появление новых вариантов вирусов приводят к необходимости постоянного обновления состава противогриппозных вакцин. Один из вариантов решения данной проблемы — разработка вакцин, направленных на усиление перекрестной защиты от широкого спектра штаммов гриппа. Генно-инженерные препараты на основе живой гриппозной вакцины могут быть использованы для направленной стимуляции клеточного звена иммунного ответа. Экспериментально доказано, что эпитопы цитотоксических T-лимфоцитов, встроенные в ген NS штамма живой гриппозной вакцины, вызывают активацию лимфоцитов и формирование пула резидентных Т-клеток памяти в легких у модельных животных. При выборе эпитопов для встраивания оптимально применять экспериментально подтвержденные иммуногенные участки.

Цель данной работы — получение экспериментальных штаммов вируса гриппа А на основе донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 с модифицированным геном NS, в который встроены иммуногенные эпитопы белка PB1, а также оценка свойств этих штаммов in vitro.

Материалы и методы. В ген, кодирующий белок NS1, встраивали кассету, содержащую иммуногенные, консервативные среди широкого спектра штаммов гриппа Т-клеточные эпитопы белка PB1 вируса гриппа, специфичные для распространенных вариантов HLA-подтипов. Модифицированный ген NS клонировали в вектор для обратной генетики вируса гриппа pCIPolISapIT. Жизнеспособный вирус гриппа получали путем трансфекции клеток Vero методом электропорации на основе стандартной 8-плазмидной системы. Ростовые характеристики вирусов оценивали в развивающихся куриных эмбрионах.

Результаты. Получены три штамма на основе донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 с модифицированным геном NS и современных вирусов гриппа подтипов H1N1, H3N2, H7N9. Таким образом, модификация NS путем вставки комбинации иммуногенных эпитопов PB1 не влияла на жизнеспособность полученных химерных вакцинных штаммов независимо от состава поверхностных белков. Данные штаммы могут эффективно размножаться в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре, являются температурочувствительными и способны к репликации при сниженной температуре.

Заключение. Полученные штаммы можно считать перспективными кандидатами для дальнейшего изучения в качестве экспериментальной гриппозной вакцины, направленной на усиленную стимуляцию Т-клеточного иммунного ответа расширенного спектра действия.