PRPF19 mRNA encodes a small open reading frame that is important for viability of human cells

Cover Page

Cite item

Full Text

Abstract

High-throughput ribosome profiling demonstrated the translation of thousands small open reading frames located in the 5′ untranslated regions of messenger RNAs (upstream ORFs). Upstream ORF can both perform a regulatory function by influencing the translation of the downstream main ORF, and encode a small functional protein or microprotein. In this work, we showed that the 5′ untranslated region of the PRPF19 mRNA encodes an upstream ORF that is translated in human cells. Inactivation of this upstream ORF reduces the viability of human cells.

Full Text

Введение

Изобретение метода высокопроизводительного рибосомного профилирования позволило обнаружить трансляцию множества молекул РНК, а также участков матричных РНК (мРНК), которые прежде считались некодирующими [1]. Последующие исследования раскрыли важную роль многих продуктов трансляции “некодирующих” РНК [2–4]. Интересным примером “некодирующих” участков мРНК являются малые открытые рамки считывания (малые ОРС), расположенные в их 5’-нетранслируемой области (5’-НТО). Далее мы будем называть их вышележащие ОРС по аналогии с upstream ORF или uORF в англоязычной литературе [1]. Особенность функционирования вышележащих ОРС заключается в том, что они могут как регулировать экспрессию гена, влияя на трансляцию нижележащей основной ОРС гена, так и кодировать малые функциональные белки, роль которых может быть напрямую не связана с функцией кодируемого геном белка [5, 6].

Одним из известных генов, содержащих регуляторные вышележащие ОРС, является ATF4, кодирующий главный фактор транскрипции, необходимый для восстановления клеток в условиях стресса [7]. мРНК гена ATF4 обладает двумя вышележащими ОРС, консервативными среди млекопитающих, которые подавляют трансляцию основной ОРС в нормальных условиях, но при этом способствуют ее трансляции при различных стрессах [8].

Интересный пример вышележащей ОРС расположен в гене ASNSD1, вовлеченном в биосинтез аспарагина. Данная вышележащая ОРС кодирует малый белок ASDURF [9]. ASDURF является одной из 12 субъединиц кошаперонного комплекса PAQсомы [9], который вовлечен в биогенез ряда белковых комплексов [10].

В работах по полногеномному скринингу генов человека при помощи системы CRISPR-Cas9, выявлен ген PRPF19, который критически необходим для жизнеспособности клеток различных линий [11, 12]. Белок PRPF19 представляет собой высококонсервативный фактор сплайсинга, который включен в состав комплекса Prp19/NTC [13]. Основную функцию этого комплекса связывают с процессингом РНК и ответом на повреждение ДНК [13]. В данной работе, чтобы выяснить роль вышележащей ОРС в мРНК гена PRPF19 мы проверили, может ли транслироваться в клетках данная вышележащая ОРС при помощи репортерной конструкции, и изучили, как ее инактивация влияет на жизнеспособность клеток.

Материалы и методы

Культуры клеток. Клетки HEK293T (производная линия из почки эмбриона человека) и HAP1 (практически гаплоидная производная линия из хронического миелолейкоза человека) растили в среде DMEM/F12 и IMDM соответственно (Gibco) с добавлением аланил-глутамина (GlutaMAX, Gibco), 10%-й эмбриональной телячьей сыворотки (FBS, Gibco) в присутствии 100 единиц/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (Gibco) при 37 °C в атмосфере 5% CO2. Конфлюентность культур исследовали с помощью инвертированного микроскопа. Клетки были проверены на отсутствие микоплазмы (MycoReport, «Евроген»).

Клетки трансфицировали согласно протоколу производителя, используя набор Lipofectamine 3000 Transfection Reagent (Invitrogen). С помощью этого же набора получали лентивирусные частицы согласно примечанию по применению от производителя.

Для анализа конкуренции клетки трансдуцировали вирусными частицами, кодирующими гидовую РНК/Cas9 и ген зеленого флуоресцентного белка (EGFP), примерно с 50%-й эффективностью и оценивали процент выживших клеток c флуоресценцией EGFP на проточном цитометре MACSQuant Analyser (Miltenyi Biotec) в течение нескольких суток.

Быстрая амплификация 5’-концов кДНК (5’RACE) 5’RACE проводили согласно протоколу производителя (5’ RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends, version 2.0, Invitrogen). РНК выделяли из клеток HEK293T при помощи набора PureLink RNA Mini Kit (Invitrogen). Для получения кДНК и последующей амплификации использовали олигонуклеотиды 5’-GTCTTCCCTCTCTTCTTGC-3’ и 5’-GGTTAGCACAGTGGCTTTGTC-3’ соответственно.

Плазмиды и конструкции. Плазмида для проверки трансляции вышележащей ОРС сделана на основе вектора pHaloTag-EGFP (Addgene #86629), в котором последовательность HaloTag заменили на последовательность, соответствующую 5’-концу основной изоформы мРНК гена PRPF19 со вставкой последовательности HiBiT перед стоп-кодоном вышележащей ОРС.

Плазмида для внесения случайных мутаций с помощью CRISPR-Cas9 сделана на основе вектора LeGO-iG2 (Addgene #27341), в которую перед SFFV промотором поместили последовательность из вектора lentiGuide-Puro (Addgene #52963) от U6-промотора до остова гидовой РНК с терминатором транскрипции. Направляющую последовательность гидовой РНК клонировали в полученный вектор путем отжига олигонуклеотидов и их лигирования в вектор после рестрикции BsmBI. Использовали следующие олигонуклеотиды: 5’-CACCGCTACGCTAGCATCGCTCGGC-3’ и 5’-AAACGCCGAGCGATGCTAGCGTAGC-3’, 5’-CACCGAGCGCTACGCTAGCATCGCT-3’ и 5’-AAACAGCGATGCTAGCGTAGCGCTC-3’ для вышележащей ОРС PRPF19;5’-CACCGCGCGACGACTCAACCTAGTC-3’ и 5’-AAACGACTAGGTTGAGTCGTCGCGC-3’ для отрицательного контроля; 5’-CACCGATACGTGCAAATTCACCAGA-3’ и 5’-AAACTCTGGTGAATTTGCACGTATC-3’, 5’-CACCGTGGCCAGGTTGCGGTCGCAG-3’ и 5’-AAACCTGCGACCGCAACCTGGCCAC-3’ для положительных контролей (на ген PCNA).

Детекция люциферазной активности, опосредованной HiBiT. Для детекции активности люциферазы, образующейся при связывании большой субъединицы люциферазы LgBiT и пептида HiBiT, использовали набор Nano-Glo HiBiT Lytic Detection System (Promega) в 96-луночном формате согласно протоколу производителя. Интенсивность люминесценции (RLU) каждого образца определяли с помощью Victor X5 plate reader (Perkin Elmer).

Статистический анализ. Статистический анализ проводили с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 6.0 (GraphPad, США). Статистическую значимость определяли с помощью t-теста не менее чем для трех повторов.

Результаты и их обсуждение

Согласно базе данных Ensemble основной изоформой мРНК гена PRPF19 является ENST00000227524. Простым способом выявления ОРС в РНК является анализ интересующей последовательности при помощи транскриптомного браузера Trips-Viz [14], который позволяет визуализировать данные рибосомного профилирования. Используя Trips-Viz, можно распределить совокупные данные рибосомного профилирования из разных исследований по трем возможным рамкам считывания.

Чтобы оценить, с какими участками основной изоформы мРНК гена PRPF19 связаны транслирующие рибосомы (рис. 1), мы выбрали в Trips-Viz режим однозначного отнесения прочтений из рибосомного профилирования, таким образом, все отображенные данные должны относиться только к транскриптам гена PRPF19.

 

Рис. 1. Рибосомное профилирование основной изоформы мРНК гена PRPF19 человека (ENST00000227524) согласно базе Ensemble, отображенное в транскриптомном браузере Trips-Viz. На схеме внизу отмечены разными цветами три возможные рамки считывания и соответствующие им профили на графике. На схеме рамок считывания черным отмечены стоп-кодоны (UGA, UAA, UAG), белым отмечены старт-кодоны (AUG).

 

Мы обнаружили, что помимо аннотированной основной ОРС в рамке считывания № 3, отмеченной синим (см. рис. 1), в 5’-НТО основной изоформы мРНК также присутствует отмеченный красным профиль, который относится к рамке считывания № 1 (см. рис. 1) и содержит только один стоп-кодон, который расположен в начале транскрипта. Все это свидетельствует о том, что в 5’-НТО мРНК гена PRPF19 может транслироваться вышележащая ОРС. Интересно, что при этом в 5’-НТО отсутствует старт-кодон AUG, поэтому трансляция такой вышележащей ОРС должна начинаться с неканонического старт-кодона.

Чтобы подтвердить, что трансляция вышележащей ОРС гена PRPF19 начинается с неканонического старт-кодона, мы выбрали только данные профилирования в Trips-Viz, полученные при остановке рибосом на стадии инициации трансляции в условиях обработки клеток харрингтонином или лактимидомицином (рис. 2).

 

Рис. 2. Профилирование инициирующих рибосом основной изоформы мРНК гена PRPF19 человека (ENST00000227524) согласно базе Ensemble, отображенное в транскриптомном браузере Trips-Viz. На схеме разными цветами отмечены три возможные рамки считывания и соответствующие им профили на графике. На схеме внизу черным отмечены стоп-кодоны (UGA, UAA, UAG), белым отмечены старт-кодоны (AUG).

 

Полученный суммарный профиль инициирующих рибосом из разных исследований показывает, что трансляция вышележащей ОРС может начинаться с нескольких старт-кодонов. Красные пики в области 5’-НТО мРНК на графике соответствуют кодонам CUG, GUG, AUC, которые близки к AUG и могут выступать в качестве старт-кодонов при инициации трансляции [15].

Вероятность трансляции вышележащей ОРС в мРНК гена PRPF19 высока, о чем свидетельствует сопоставимое и даже большее содержание рибосом, особенно инициирующих на ней, в сравнении с основной ОРС. Для этого мы подтвердили, что в клетках человека HAP1 присутствует только одна изоформа мРНК гена PRPF19. Для этого мы получили кДНК, используя два олигонуклеотида, комплементарные 7 и 8 экзонам PRPF19, и провели анализ изоформ мРНК гена PRPF19 методом 5’RACE. Экзоны 7 и 8 содержатся во всех аннотированных в Ensemble транскриптах гена PRPF19, которые содержат хотя бы часть первого экзона основной изоформы, где расположена предполагаемая вышележащая ОРС. Мы смогли обнаружить только последовательность, которая полностью соответствует основной изоформе мРНК гена PRPF19 из Ensemble. Таким образом, данные рибосомного профилирования могут относиться только к одной мРНК гена PRPF19.

Перед изучением вышележащей ОРС необходимо подтвердить, что она действительно транслируется. С этой целью мы поместили последовательность, соответствующую 5’-концу мРНК гена PRPF19, включая начало ОРС белка PRPF19, перед ОРС зеленого флуоресцентного белка (EGFP). В данной репортерной конструкции мы добавили на C-конец предполагаемого пептида последовательность белковой метки HiBiT, состоящую из 11 аминокислот (рис. 3А). HiBiT позволяет детектировать наличие пептида в образце за счет люминесценции, которая возникает при комлементации неактивной субъединицы люциферазы LgBiT меткой HiBiT. В качестве контрольной конструкции использовали исходный вектор без вставки последовательности 5’-конца мРНК гена PRPF19. Мы трансфицировали клетки HEK293T полученными конструкциями и измерили люциферазную активность, опосредованную HiBiT (см. рис. 3Б). Сигнал люминесценции в лизатах клеток, трансфицированных репортерной конструкцией, примерно в 120 раз превышал фоновый сигнал, наблюдаемый в лизатах клеток, трансфицированных контрольной конструкцией (см. рис. 3Б). Таким образом, мы показали, что вышележащая ОРС в 5’-НТО мРНК гена PRPF19 может транслироваться в клетках человека in vitro.

 

Рис. 3. Подтверждение трансляции вышележащей ОРС гена PRPF19 с помощью репортерной конструкции: схема репортерной конструкции. Часть ОРС белка PRPF19 соединена с ОРС EGFP. вОРС – вышележащая ОРС (А); измерение люциферазной активности, опосредованной HiBiT, в лизатах клеток после трансфекции репортерными конструкциями. Показаны средние значения и стандартные отклонения для 4 независимых трансфекций. RLU – относительные световые единицы; *** – p-значение < 0.001 (Б).

 

Таким образом, мы подтвердили трансляцию вышележащей ОРС в мРНК гена PRPF19 человека. Мы решили проверить, кодирует ли эта ОРС малый белок. Функциональность продукта трансляции можно косвенно оценить, определив консервативность кодирующей его ОРС. Для этого мы выбрали первый предполагаемый старт-кодон как начало ОРС у человека и выровняли последовательности вышележащей ОРС среди млекопитающих в геномном браузере CodAlignView [16] (рис. 4А).

 

Рис. 4. Анализ консервативности вышележащей ОРС гена PRPF19 среди млекопитающих: выравнивание вышележащей ОРС гена PRPF19 в геномном браузере CodAlignView среди некоторых млекопитающих. Указаны положения первого старт-кодона вышележащей ОРС у человека по данным на рис. 2 и стоп-кодона (A); Выравнивание последовательностей белков, кодируемых вышележащей ОРС в мРНК гена PRPF19, среди указанных видов в MSA4U [17]often encoding so-called leader peptides. Начало белка выбрано по первому возможному старт-кодону в соответствующей рамке считывания (Б).

 

Мы обнаружили, что вышележащая ОРС в мРНК гена PRPF19 высококонсервативна среди многих млекопитающих, тем не менее присутствует ряд несинонимичных замен, а также вставок и делеций, которые должны приводить к замене аминокислот в белковом продукте (см. рис. 4А). При этом многие потенциальные старт-кодоны неконсервативны (рис. 4А), что указывает на возможную эволюционную пластичность в инициации трансляции данной вышележащей ОРС. Поэтому мы выровняли последовательности кодируемого ей белка среди некоторых млекопитающих (см. рис. 4Б). Мы обнаружили, что рассмотренный белок в целом умеренно консервативен среди млекопитающих, однако он более консервативен в C-концевой части. Таким образом, данная малая ОРС и кодируемый ей белок могут быть важны для жизнеспособности клетки.

Далее мы оценили, влияют ли мутации в последовательности данной вышележащей ОРС на жизнеспособность клетки. Для этого мы подобрали две наиболее специфичные гидовые РНК, нацеленные на середину вышележащей ОРС, так что расстояние от старта транскрипции или от начала основной ОРС гена PRPF19 до ближайшего места разрезания составляло 71 и 128 нуклеотидов соответственно, и использовали их для внесения случайных мутаций с помощью системы CRISPR-Cas9. Таким образом, возникающие мутации не должны влиять на транскрипцию гена PRPF19 или трансляцию основной ОРС, но будут инактивировать вышележащую ОРС при сдвиге рамки считывания. Мы провели эксперимент по анализу конкуренции между клетками дикого типа и клетками с набором образующихся случайных мутаций в вышележащей ОРС при экспрессии гидовой РНК (рис. 5). В качестве положительного контроля использовали гидовые РНК, нацеленные на ген PCNA, который необходим для репликации ДНК, а в качестве отрицательного – гидовую РНК, не имеющую комплементарного участка в геноме.

 

Рис. 5. Анализ конкуренции между клетками HAP1 дикого типа и клетками, экспрессирующими гидовые РНК, в течение нескольких дней. Показана относительная доля клеток, экспрессирующих гидовую РНК и EGFP, по третьему дню после трансдукции лентивирусами. Показаны средние значения и стандартное отклонение для трех независимых заражений клеток. ** – p-значение < 0.01. “вОРС” – вышележащая ОРС.

 

Мы обнаружили, что экспрессия гидовых РНК, инактивирующих вышележащую ОРС в PRPF19, но не контрольной гидовой РНК, снижает жизнеспособность клеток (см. рис. 5).

Полученные в работе данные указывают на то, что вышележащая ОРС в мРНК гена PRPF19 может транслироваться в клетках человека in vitro. При этом кодируемый ею малый белок консервативен среди млекопитающих. Мутации в вышележащей ОРС приводят к снижению жизнеспособности клеток человека. Таким образом, либо потеря малого белка, либо нарушение регуляторной активности вышележащей ОРС приводит к снижению жизнеспособности клеток человека.

Заключение

Итак, 5’-нетранслируемая область мРНК гена PRPF19 содержит вышележащую ОРС, которая транслируется в клетках человека in vitro, как было показано с использованием репортерной конструкции. Инактивация данной вышележащей ОРС снижает жизнеспособность клеток человека. Консервативность белка, кодируемого вышележащей ОРС в мРНК гена PRPF19, среди млекопитающих указывает на то, что именно он может быть необходим для жизнеспособности клетки. В то же время нельзя исключать, что данная вышележащая ОРС регулирует трансляцию основной ОРС, и содержание белка PRPF19 в клетке соответственно. Регуляторная роль вышележащей ОРС в мРНК гена PRPF19 также может иметь значение для жизнеспособности клетки.

Конфликт интересов

Конфликт интересов у авторов отсутствует.

Благодарности

Выражаем благодарность Программе развития МГУ ПНР-5 за предоставление доступа к проточному цитометру MACSQuant Analyser, планшетному мультиридеру Victor X5 plate reader и капиллярному секвенатору SeqStudio.

Источник финансирования

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант № 23-14-00058).

Соблюдение этических норм и стандартов

В данной работе отсутствуют исследования человека или животных.

×

About the authors

N. M. Shepelev

Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry of the Russian Academy of Sciences; Lomonosov Moscow State University

Author for correspondence.
Email: mprubtsova@gmail.com

Department of Chemistry

Russian Federation, Moscow; Moscow

А. О. Kurochkina

Lomonosov Moscow State University

Email: mprubtsova@gmail.com

Department of Chemistry

Russian Federation, Moscow

О. А. Dontsova

Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry of the Russian Academy of Sciences; A. N. Belozersky Institute of Physico-Chemical BiologyLomonosov Moscow State University; Skolkovo Institute of Science and Technology

Email: mprubtsova@gmail.com

Academician, Department of Chemistry, Center for Molecular and Cellular Biology

Russian Federation, Moscow; Moscow; Moscow; Moscow

M. P. Rubtsova

Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry of the Russian Academy of Sciences; Lomonosov Moscow State University

Email: mprubtsova@gmail.com

Department of Chemistry

Russian Federation, Moscow; Moscow

References

  1. Brar G. A., Weissman J. S. Ribosome profiling reveals the what, when, where and how of protein synthesis // Nat Rev Mol Cell Biol. 2015. V. 16. № 11. P. 651–664.
  2. Rubtsova M., Naraykina Y., Vasilkova D., et al. Protein encoded in human telomerase RNA is involved in cell protective pathways // Nucleic Acids Research. 2018. V. 46, № 17. P. 8966–8977.
  3. Chugunova A., Loseva E., Mazin P., et al. LINC00116 codes for a mitochondrial peptide linking respiration and lipid metabolism // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2019. V. 116, № 11. P. 4940–4945.
  4. Sergiev P.V., Rubtsova M.P. Little but Loud. The Diversity of Functions of Small Proteins and Peptides – Translational Products of Short Reading Frames // Biochemistry Moscow. 2021. V. 86, № 9. P. 1139–1150.
  5. Wethmar K. The regulatory potential of upstream open reading frames in eukaryotic gene expression // WIREs RNA. 2014. V. 5, № 6. P. 765–768.
  6. Renz P.F., Valdivia-Francia F., Sendoel A. Some like it translated: small ORFs in the 5′UTR // Experimental Cell Research. 2020. V. 396, № 1. P. 112229.
  7. Ameri K., Harris A.L. Activating transcription factor 4 // The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 2008. V. 40, № 1. P. 14–21.
  8. Vattem K.M., Wek R.C. Reinitiation involving upstream ORFs regulates ATF4 mRNA translation in mammalian cells // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2004. V. 101, № 31. P. 11269–11274.
  9. Cloutier P., Poitras C., Faubert D., et al. Upstream ORF-Encoded ASDURF Is a Novel Prefoldin-like Subunit of the PAQosome // J. Proteome Res. 2020. V. 19, № 1. P. 18–27.
  10. Pinard M., Cloutier P., Poitras C., et al. Unphosphorylated Form of the PAQosome Core Subunit RPAP3 Binds Ribosomal Preassembly Complexes to Modulate Ribosome Biogenesis // J. Proteome Res. 2022. V. 21, № 4. P. 1073–1082.
  11. Meyers R. M., Bryan J. G., McFarland J. M., et al. Computational correction of copy number effect improves specificity of CRISPR–Cas9 essentiality screens in cancer cells // Nat Genet. 2017. V. 49, № 12. P. 1779–1784.
  12. Behan F. M., Iorio F., Picco G., et al. Prioritization of cancer therapeutic targets using CRISPR–Cas9 screens // Nature. 2019. V. 568, № 7753. P. 511–516.
  13. Yin J., Zhu J.-M., Shen X.-Z. New insights into pre-mRNA processing factor 19: A multi-faceted protein in humans // Biology of the Cell. 2012. V. 104, № 12. P. 695–705.
  14. Kiniry S. J., O’Connor P.B.F., Michel A. M., et al. Trips-Viz: a transcriptome browser for exploring Ribo-Seq data // Nucleic Acids Research. 2019. V. 47, № D1. P. D847–D852.
  15. Cao X., Slavoff S.A. Non-AUG start codons: Expanding and regulating the small and alternative ORFeome // Experimental Cell Research. 2020. V. 391, № 1. P. 111973.
  16. Jungreis, I., Lin, M. F., Chan, C. S., et al. CodAlignView: A tool for visualizing protein-coding constraint. 2016.
  17. Egorov A. A., Atkinson G. C. uORF4u: a tool for annotation of conserved upstream open reading frames // Bioinformatics. 2023. V. 39, № 5. P. btad323.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download
2. Fig. 1. Ribosomal profiling of the main mRNA isoform of the human PRPF19 gene (ENST00000227524) according to the Ensemble database, displayed in the Trips-Viz transcriptome browser. In the diagram below, three possible reading frames and their corresponding profiles on the graph are marked in different colors. On the reading frame diagram, stop codons (UGA, UAA, UAG) are marked in black, and start codons (AUG) are marked in white.

Download (297KB)
Indexing metadata
3. Fig. 2. Profiling of initiating ribosomes of the main mRNA isoform of the human PRPF19 gene (ENST00000227524) according to the Ensemble database, displayed in the Trips-Viz transcriptome browser. In the diagram, three possible reading frames and their corresponding profiles on the graph are marked in different colors. In the diagram below, stop codons (UGA, UAA, UAG) are marked in black, start codons (AUG) are marked in white.

Download (316KB)
Indexing metadata
4. Fig. 3. Confirmation of translation of the upstream ORF of the PRPF19 gene using a reporter construct: scheme of the reporter construct. Part of the PRPF19 ORF is connected to the EGFP ORF. vORS – overlying ORS (A); measurement of HiBiT-mediated luciferase activity in cell lysates after transfection with reporter constructs. Means and standard deviations for 4 independent transfections are shown. RLU – relative light units; *** – p-value < 0.001 (B).

Download (113KB)
Indexing metadata
5. Fig. 4. Analysis of the conservation of the upstream ORF of the PRPF19 gene among mammals: alignment of the upstream ORF of the PRPF19 gene in the CodAlignView genomic browser among some mammals. The positions of the first start codon of the upstream ORF in humans are indicated according to the data in Fig. 2 and stop codon (A); Alignment of protein sequences encoded by the upstream ORF in the PRPF19 gene mRNA among the indicated species in MSA4U [17]often encoding so-called leader peptides. The beginning of the protein is selected by the first possible start codon in the corresponding reading frame (B).

Download (1MB)
Indexing metadata
6. Fig. 5. Analysis of competition between wild-type HAP1 cells and cells expressing guide RNAs over several days. The relative proportion of cells expressing guide RNA and EGFP by day three after lentiviral transduction is shown. Shown are the means and standard deviations of three independent cell infections. ** – p-value < 0.01. “vORS” – overlying ORS.

Download (66KB)
Indexing metadata

Copyright (c) 2024 Russian Academy of Sciences

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».