Предварительное исследование: первичная оптимизация метода формирования биопленки in vitro у штамма Trichosporon asahii, выделенного от пациентов в Турции

Trichosporon asahii — грибок, встречающийся в природе и микробиоте человека, недавно стал наиболее распространенной причиной диссеминированного глубокого трихоспороноза, особенно у пациентов с ослабленным иммунитетом. Образование биопленки, один из важных факторов вирулентности T. asahii, облегчает его колонизацию и распространение, обеспечивая грибку устойчивость к противогрибковым препаратам и внешнему стрессу. В настоящем исследовании мы попытались разработать воспроизводимую модель биопленки T. asahii для последующих исследований путем оптимизации концентрации инокулята, времени адгезии, времени созревания биопленки, статических параметров и параметров встряхивания. Материалы и методы. В исследование были включены два клинических изолята, полученных из образцов мочи, и эталонный штамм. Для каждого штамма применялись 36 различных экспериментальных параметра, включая концентрации инокулята 10⁵, 10⁶ и 10⁷ КОЕ/мл, время адгезии 60, 90 и 120 минут, время созревания 48 и 72 часа и статику против встряхивания. Мы определили образование биопленки грибка, используя наиболее часто используемый метод окраски кристаллическим фиолетовым. Были определены значения стандартного отклонения с тремя повторами каждого эксперимента со сравнением всех графиков, полученных при двухкратном повторе проведенных экспериментов. Результаты. После применения 36 различных комбинаций экспериментальных параметров были определены наиболее оптимизированные и воспроизводимые из них, такие как концентрация инокулята 10⁷ КОЕ/мл, время адгезии 120 минут, время созревания 72 часа и статика. Заключение. В исследованиях по оптимизации, описанных в литературе, сообщалось, что образование биопленок различается по количеству и продолжительности в разных зарубежных лабораториях, но в Турции подобных исследований по оптимизации не описано. Мы считаем, что условия оптимизации, которые мы впервые определили в нашей стране, будут востребованы для последующих исследований.