Методические подходы к сравнительной оценке клеточных реакций врожденного иммунитета у моллюсков Pomacea sp. (Caenogastropoda, Ampullariidae) при экспериментальном асептическом воспалении
- Авторы: Хрущёв К.А.1, Шилов С.Ю.2,3, Барков С.Ю.2,3, Шилов Ю.И.1,2,3
-
Учреждения:
- ФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»
- Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук
- ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ
- Выпуск: Том 27, № 4 (2024)
- Страницы: 749-756
- Раздел: КРАТКИЕ СООБЩЕНИЯ
- URL: https://bakhtiniada.ru/1028-7221/article/view/267846
- DOI: https://doi.org/10.46235/1028-7221-16939-MAT
- ID: 267846
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Одной из существенных методических проблем, возникающих при исследовании клеток врожденного иммунитета беспозвоночных животных, является непригодность культуральных сред и даже солевых растворов, предназначенных для млекопитающих и человека. Другой важный методический момент – значительно выраженные реакции коагуляции, играющие важнейшую защитную роль у всех беспозвоночных животных, но проявляющиеся in vitro в клеточных суспензиях, приготовленных даже на оптимальных для данного животного солевых растворах. Для решения этой проблемы современные исследователи широко используют даже в функциональных тестах антикоагуляционный буфер с этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА). С позиций традиционных подходов иммунологии млекопитающих использование ЭДТА возможно только для исследования морфологии клеток, но не их функций. Цель работы – адаптация методических подходов к сравнительной оценке клеточных реакций врожденного иммунитета у моллюсков Pomacea sp. при экспериментальном асептическом воспалении. Для оценки функций фагоцитирующих клеток у моллюсков Pomacea sp. мы использовали полный солевый раствор (ПСР) с оптимальными концентрациями глюкозы, ионов кальция, магния с обязательным добавлением для предотвращения коагуляции, клеточной агрегации и дегрануляции вместо ЭДТА натриевой соли гепарина в концентрации 100 ЕД/мл (ПСР-геп). В специально проведенном эксперименте показано, что при инкубации клеток гемолимфы в этом растворе сохраняется их жизнеспособность, оцениваемая методом проточной лазерной цитометрии при инкубации с аннексином V-PE (PE Annexin V) и 7-аминоактиномицином D (7-AAD), а также в тесте с трипановым синим. Показана возможность исследования с использованием ПСР-геп поглотительной активности и ацидификации фагосом лейкоцитов гемолимфы, органа кроветворения (почки) и очага воспаления, индуцированного внутримышечным введением стерильной суспензии зимозана. В отличие от моллюсков Lymnaea stagnalis и Biomphalaria glabrata, у которых хорошо документирована продукция активных форм кислорода фагоцитами в реакции люминолзависимой хемилюминисценции, мы не смогли индуцировать эту реакцию у моллюсков Pomacea sp. В специально проведенном эксперименте мы не выявили влияния натриевой соли гепарина в концентрации 100 ЕД/мл на продукцию активных форм кислорода фагоцитами крыс.
Полный текст
Открыть статью на сайте журналаОб авторах
К. А. Хрущёв
ФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»
Email: jshilov@mail.ru
студент 4-го курса биологического факультета
Россия, г. ПермьС. Ю. Шилов
Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук; ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ
Автор, ответственный за переписку.
Email: jshilov@mail.ru
к.м.н., младший научный сотрудник лаборатории экологической иммунологии, Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук; доцент кафедры нормальной физиологии ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ
Россия, г. Пермь, ул. Голева, 13; г. ПермьС. Ю. Барков
Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук; ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ
Email: jshilov@mail.ru
очный аспирант лаборатории экологической иммунологии, Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук; старший лаборант кафедры иммунологии ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ
Россия, г. Пермь, ул. Голева, 13; г. ПермьЮ. И. Шилов
ФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»; Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук; ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ
Email: jshilov@mail.ru
к.м.н., доцент, старший научный сотрудник лаборатории экологической иммунологии, Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук – филиал ФГБУН «Пермский федеральный исследовательский центр» Уральского отделения Российской академии наук; доцент кафедры иммунологии ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения РФ; доцент кафедры микробиологии и иммунологии ФГАОУ ВО «Пермский государственный национальный исследовательский университет»
Россия, г. Пермь; г. Пермь, ул. Голева, 13; г. ПермьСписок литературы
- Глупов В.В., Слепнева И.А. Механизмы цитотоксичности // Патогены насекомых: Структурные и функциональные аспекты / Под ред. В.В. Глупова. М.: Круглый год, 2001. С. 501-513. [Glupov V.V., Slepneva I.A. Mechanisms of cytotoxicity. In: Insect pathogens: Structural and functional aspects. Ed.by V.V. Glupov]. Moscow: Kruglyy god, 2001, pp. 501-513.
- Мечников И.И. Лекции о сравнительной патологии воспаления, читанные в апреле и мае 1891 г. в Пастеровском Институте. СПб.: К.Л. Риккера, 1892. 162 c.; Мечников И.И. Лекции о сравнительной патологии воспаления. – 2-е изд. – М., Птг.: Гос. изд-во, 1923. 173 с. [Leçons sur la pathologie comparée de l’inflammation: faites à l›Institut Pasteur en avril et mai 1891 / par Élie Metchnikoff , Chef de Service and l’lnstitut Pasteur. Paris: G. Masson. 1892; Lectures on the comparative pathology of inflammation delivered at the Pasteur Institute in 1891 / by Elie Metchnikoff; translated from the French by F.A. Starling and E.H. Starling. Metchnikoff, Elie, 1845-1916. Date: 1893.
- Шилов Ю.И., Шилов С.Ю., Барков С.Ю., Туляев Я.А., Котегов В.П., Баева Т.А., Шилова Н.А. Нейроэндокринная и фармакологическая регуляция функций фагоцитирующих клеток при экспериментальном зимозановом перитоните // Вестник Пермского федерального исследовательского центра, 2021. № 2. С. 15-26. [Shilov Ju.I., Shilov S.Ju., Barkov S.Ju., Tulyaev Ya.A., Kotegov V.P. Baeva T.A., Shilova N.A. Neuroendocrine and pharmacological regulation of functions of phagocytic cells under experimental zymosan-induced peritonitis. Vestnik Permskogo federalnogo issledovatelskogo tsentra = Perm Federal Research Center Journal, 2021, no. 2, pp. 15-26. (In Russ.)]
- Adema C.M., van Deutekom-Mulder E.C., van der Knaap W.P.W., Sminia T. Schistosomicidal activities of Lymnaea stagnalis haemocytes: the role of oxygen radicals. Parasitology, 1994, Vol. 109, Pt 4, pp. 479-485.
- Cooper E.L. Advances in comparative immunology. Introduction. In: Advances in Comparative Immunology. Ed. by Edwin L. Cooper. Publisher: Springer International Publishing, 2018, pp. XIII-XVIII.
- Cueto J.A., Giraud-Billoud M., Vega I.A., Castro-Vazquez A. Haemolymph plasma constituents of the invasive snail Pomacea canaliculata (Caenogastropoda, Architaenioglossa, Ampullariidae). Molluscan Res., 2011, Vol. 31, pp. 57-60.
- Cueto J.A., Rodriguez C., Vega I.A., Castro-Vazquez A. Immune defenses of the invasive apple snail Pomacea canaliculata (Caenogastropoda, Ampullariidae): Phagocytic hemocytes in the circulation and the kidney. PLoS One, 2015, Vol. 10, no. 4, e0123964. doi: 10.1371/journal.pone.0123964.
- Exotic animal laboratory diagnosis. Ed. by J. Jill Heatley, Karen Russell. Description: Hoboken N.J.: Wiley Blackwell, 2020. 630 p.
- Ginsburg I., Misgav R., Gibbs D.F., Varani J., Kohen R. Chemiluminescence in activated human neutrophils: role of buffers and scavengers. Inflammation, 1993, Vol. 17, no. 3, pp. 227-243.
- Jiravanichpaisal P., Lee B.L., Söderhäll K. Cell-mediated immunity in arthropods: hematopoiesis, coagulation, melanization and opsonization. Immunobiologym, 2006, Vol. 211, no. 4, pp. 213-236.
- Lemaitre B., Nicolas E., Michaut L., Reichhart J.M., Hoffmann J.A. The dorsoventral regulatory gene cassette spätzle/Toll/cactus controls the potent antifungal response in Drosophila adults. Cell, 1996, Vol. 86, no. 6, pp. 973-983.
- Medzhitov R., Janeway C.A. Jr. Innate immunity: the virtues of a nonclonal system of recognition. Cell, 1997, Vol. 91, no. 3, pp. 295-298.
- Poltorak A., He X., Smirnova I., Liu M.Y., Van Huffel C., Du X., Birdwell D., Alejos E., Silva M., Galanos C., Freudenberg M., Ricciardi-Castagnoli P., Layton B., Beutler B. Defective LPS signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr mice: mutations in Tlr4 gene. Science, 1998, Vol. 282, no. 5396, pp. 2085-2088.
- Rodriguez C., Simon V., Conget P., Vega I.A. Both quiescent and proliferating cells circulate in the blood of the invasive apple snail Pomacea canaliculata. Fish Shellfish Immunol., 2020, Vol. 107, Pt A, pp. 95-103.
- Song W.Y., Wang G.L., Chen L.L., Kim H.S., Pi L.Y., Holsten T., Gardner J., Wang B., Zhai W.X., Zhu L.H., Fauquet C., Ronald P. A receptor kinase-like protein encoded by the rice disease resistance gene, Xa21. Science, 1995, Vol. 270, no. 5243, pp. 1804-1806.
Дополнительные файлы
