ПОЛУЧЕНИЕ АЛЛЕРГЕНА Bet v 2 ПЫЛЬЦЫ БЕРЕЗЫ ПОВИСЛОЙ С ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫМИ СИГНАЛАМИ И ЕГО УЗНАВАНИЕ IgE АНТИТЕЛАМИ


Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Цель. создание рекомбинантных белков, содержащих профилин и сигнальные пептиды, обеспечивающие протеасомный или лизосомный пути деградации белков. Материалы и методы. Б качестве базового вектора использовали плазмиду pET-Bet v 2, кодирующую аллерген Bet v 2. Б данный вектор клонировали два сигнальных пептида: C-концевой фрагмент орнитиндекарбоксилазы (ODCsig) и N-концевой фрагмент инвариантной цепи человека (Ii). Рекомбинантные белки нарабатывали в E. coli штамма BL21(DE3). Рекомбинантный белок очищали с использованием Ni-NTA агарозы. Оценку иммунологической специфичности рекомбинантных белков проводили иммуноферментным методом c использованием сывороток крови пациентов, страдающих аллергией на пыльцу березы. Результаты. Для изменения соотношения IgE/IgG ответа аллерген Bet v 2 (профилин) пыльцы березы повислой модифицирован иммунорегуляторными пептидами. Для усиления Тh1-ответа использован сигнал деградации на протеасоме орнитиндекарбоксилазы и для Тh2-ответа — сигнал направления в лизосомы инвариантной цепи человека. Разработана система по наработке препаратов рекомбинантного аллергена Bet v 2, пригодного для иммунологических тестов. Полученные высокоочищенные препараты химерных белков эффективно связывали антитела изотипа IgE сывороток крови больных с гиперчувствительностью к пыльце березы. Заключение. Были созданы и выделены новые химерные аллергены на основе белка Bet v 2 пыльцы березы повислой.

Об авторах

Н Л Рябова

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

г. Москва

Ю В Кузьменко

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

г. Москва

Б Б Тютяева

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

г. Москва

И Б Андреев

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

г. Москва

М Н Санков

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

г. Москва

Е С Стародубова

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

г. Москва

О Б Преображенская

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

г. Москва

Александр Игоревич Мартынов

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Email: medimm@mail.ru
г. Москва

Б Л Карпов

ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

г. Москва

Список литературы

  1. Gafvelin G., Parmley S., Neimert-Andersson T. et al. Hypoallergens for allergen-specific immunotherapy by directed molecular evolution of mite group 2 allergens. The Journal of biological chemistry. 2007, v. 9, p. 3778-3787.
  2. Leifert J.A., Rodriguez-Carreno М.Р., Rodriguez F. et al. Targeting plasmid-encoded proteins to the antigen presentation pathways. Immunol. Rev. 2004, v. 199, p. 40-53.
  3. Стародубова Е.С., Исагулянц М.Г., Карпов В.Л. Регуляция процессинга иммуногена: сигнальные последовательности и их использование для создания нового поколения ДНК-вакцин. Acta Naturae. 2010, № 1, c. 59-65.
  4. Sirvent S., Tordesillas L., Villalba М. et al. Pollen and plant food profilin allergens show equivalent IgE reactivity, Ann. Allergy Asthma Immunol. 2011, v. 106, p. 429-435.
  5. Стародубова Е.С., Исагулянц М.Г., Карпов В.Л. Искусственное увеличение скорости утилизации обратной транскриптазы ВИЧ-1 по протеасомному пути. Мол. биол. 2006, № 6, c. 983-989.
  6. Бызова Н.А., Сотников Д.В., Жердев А.В. и соавт. Иммунохроматографический анализ уровня специфического сывороточного IgE человека для диагностики аллергии на пыльцу тимофеевки луговой. Иммунология. 2010, № 1, c. 47-51.
  7. Braciale T.J., Morrison L.A., Sweetser М.T. et al. Antigen presentation pathways to class I and class II MHC-restricted T lymphocytes. Immunol. Rev. 1987, v. 98, p. 95-114.
  8. Ciechanover A. Intracellular protein degradation: from a vague idea thru the lysosome and the ubiquitin-proteasome system and onto human diseases and drug targeting. Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2005, v. 6, p. 79-87.
  9. Murakami Y., Matsufuji S., Kameji T et al. Ornithine decarboxylase is degraded by the 26S proteasome without ubiquitination. Nature. 1992, v. 360, p. 597-599.
  10. Zhang М., Pickart С.М., Coffino P. Determinants of proteasome recognition of ornithine decarboxylase, a ubiquitin-independent substrate. EMBO J. 2003, v. 22, p. 1489-1496.
  11. Bakke O., Dobberstein B. MHC class II-associated invariant chain contains a sorting signal for endosomal compartments. Cell. 1990, v. 63, p. 707-716.
  12. Odorizzi C.G., Trowbridge I.S., Xue L. et al. Sorting signals in the MHC class II invariant chain cytoplasmic tail and transmembrane region determine trafficking to an endocytic processing compartment. J. Cell Biol. 1994, v. 126, p. 317-330.
  13. Wallner М., Himly М., Neubauer A. et al. The influence of recombinant production on the immunologic behavior of birch pollen isoallergens. PloS one. 2009, v. 4, p. 8457.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Фармарус Принт Медиа, 2013

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».