Сравнение цитотоксичности синтетических сосудистых протезов in vitro

Обложка

Цитировать

Аннотация

Цель. Изучить и сравнить цитотоксичность ключевых видов синтетических протезов, используемых в артериальной реконструктивной хирургии, включая политетрафторэтилен (ПТФЭ) и полиэтилентерефталат (дакрон).

Материалы и методы. На культуре первичных эндотелиальных клеток пупочной вены человека (англ. – human umbilical vein endothelial cells, HUVEC) 3 пассажа проведен MTS-тест, используемый в лабораторных исследованиях с привлечением клеточных технологий для изучения цитотоксичности лекарственных веществ и медицинских изделий. Тест подразумевает использование реагента МТS, представляющего собой 3-(4,5-диметилтиазол2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2Н-тетразолиум; дополнительно используется феназина метосульфат (PMS), играющий роль электрон-связывающего реагента. В ходе эксперимента клетки инкубировались с ПТФЭ и дакроном в течение 24 часов при 37°С с содержанием 5% CO2. Культивированные в стандартной ростовой среде HUVEC выступили в роли контроля. MTS в присутствии PMS восстанавливался митохондриальными дегидрогеназами эндотелиальных клеток в формазан, имеющий синее окрашивание. Супернатант культур клеток фотоколорометрически при помощи анализатора Stat Fax 3200 (microplate reader) Awareness technology Inc. Palm City Fl. (США).

Результаты. Наименьшие средние значения отмечались в группе дакрона – 0,21 (0,20-0,22) единиц оптической плотности, наибольшие отмечены в группе контроля – 0,36 (0,35-0,38); показатели в группе ПТФЭ составили 0,35 (0,33-0,36). При сравнении исследуемых групп статистически значимые различия были обнаружены между группой контроля и дакрона (р<0,001), контроля и ПТФЭ (р=0,037), дакрона и ПТФЭ (р<0,001). Инкубация с дакроном привела к угнетению метаболической активности клеток на 41,7% по сравнению с группой контроля (р<0,001). Метаболическая активность клеток, подверженных воздействию ПТФЭ, была близкой к группе контроля, т.е. соответствовала оптимальным условиям культивирования эндотелиальных клеток in vitro.

Вывод. В сравнении с полиэтилентерефталатом (дакроном) политетрафторэтилен (ПТФЭ) наименее выраженно угнетал метаболическую активность эндотелиоцитов in vitro.

Об авторах

Роман Евгеньевич Калинин

ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Email: nina_mzhavanadze@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0817-9573
SPIN-код: 5009-2318
ResearcherId: M-1554-2016

д.м.н., профессор, зав. кафедрой сердечно-сосудистой, рентгенэндоваскулярной, оперативной хирургии и топографической анатомии

Россия, Рязань

Игорь Александрович Сучков

ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Email: nina_mzhavanadze@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-1292-5452
SPIN-код: 6473-8662
Scopus Author ID: M-1180-2016

д.м.н., профессор, профессор кафедры сердечно-сосудистой, рентгенэндоваскулярной, оперативной хирургии и топографической анатомии

Россия, Рязань

Нина Джансуговна Мжаванадзе

ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Автор, ответственный за переписку.
Email: nina_mzhavanadze@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-5437-1112
SPIN-код: 7757-8854
ResearcherId: M-1732-2016

к.м.н., доцент кафедры сердечно-сосудистой, рентгенэндоваскулярной, оперативной хирургии и топографической анатомии

Россия, Рязань

Наталья Васильевна Короткова

ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Email: nina_mzhavanadze@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-7974-2450
SPIN-код: 3651-3813
ResearcherId: I-8028-2018

к.м.н., доцент кафедры биологической химии с курсом клинико-лабораторной диагностики факультета дополнительного постдипломного образования

Россия, Рязань

Александр Алексеевич Никифоров

ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Email: nina_mzhavanadze@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-7364-7687
SPIN-код: 8713-0596

к.м.н., доцент, зав. ЦНИЛ

Россия, Рязань

Иван Юрьевич Суров

ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Email: nina_mzhavanadze@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-0794-4544
SPIN-код: 1489-7481

студент лечебного факультета

Россия, Рязань

Полина Юрьевна Иванова

ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Email: nina_mzhavanadze@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-6943-0277

студент лечебного факультета

Россия, Рязань

Анастасия Дмитриевна Боженова

ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Email: nina_mzhavanadze@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-2790-0303

студент лечебного факультета

Россия, Рязань

Екатерина Андреевна Стрельникова

ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России

Email: nina_mzhavanadze@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-3370-1095

Student of the Preventive Health Faculty

Россия, Рязань

Список литературы

  1. Campbell C.D., Brooks D.H., Webster M.W., et al. The use of expanded microporous polytetrafluoroethylene for limb salvage: a preliminary report // Surgery. 1976. Vol. 79, №5. P. 485-491.
  2. Eiberg J.P., Røder O., Stahl-Madsen M., et al. Fluoropolymer-coated Dacron Versus PTFE Grafts for Femorofemoral Crossover Bypass: Randomised Trial // European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 2006. Vol. 32, №4. P. 431-438. doi: 10.1016/j.ejvs.2006.04.018
  3. Sauvage L.R., Schloemer R., Wood S.J., et al. Successful Interposition Synthetic Graft Between Aorta and Right Coronary Artery. Angiographic Follow-Up to Sixteen Months // The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 1976. Vol. 72, №3. P. 418‐421.
  4. Chard R.B., Johnson D.C., Nunn G.R., et al. Aorta-Coronary Bypass Grafting with Polytetrafluoroethylene Conduits. Early and Late Outcome in Eight Patients // The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 1987. Vol. 94, №1. P. 132-134.
  5. Van Damme H., Deprez M., Creemers E., et al. Intrinsic Structural Failure of Polyester (Dacron) Vascular Grafts. A General Review // Acta Chirurgica Belgica. 2005. Vol. 105, №3. P. 249-255. doi:10. 1080/00015458.2005.11679712
  6. Greisler H.P., editor. New Biologic and Synthetic Vascular Prostheses. Austin: R.G. Landes Co; 1991.
  7. Abbott W.M., Green R.M., Matsumoto T., et al. Prosthetic above-knee femoropopliteal bypass graf-ting: results of a multicenter randomized prospective trial. Above-Knee Femoropopliteal Study Group // Journal of Vascular Surgery. 1997. Vol. 25, №1. P. 19-28. doi: 10.1016/S0741-5214(97)70317-3
  8. Padera R.F., Schoen F.J. Cardiovascular medical devices. In: Ratner B.D., Hoffman A.S., Schoen F.J., et al., editors. Biomaterials Science: an introduction to materials in medicine. 2nd ed. San Diego: Elsiver Academic Press; 2004. Pt. II, chr. 7.3. P. 470-493.
  9. Byrom M.J., Ng M.K., Bannon P.G. Biomechanics and biocompatibility of the perfect conduit-can we build one? // Annals of Cardiothoracic Surgery. 2013. Vol. 2, №4. P. 435-443. doi: 10.3978/j.issn. 2225-319X.2013.05.04
  10. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Короткова Н.В., и др. Изучение молекулярных механизмов эндотелиальной дисфункции in vitro // Гены & Клетки. 2019. Т. 14, №1. С. 22-32. doi: 10.23868/201903003
  11. Калинин Р.Е., Абаленихина Ю.В., Пшенников А.C., и др. Взаимосвязь окислительного карбонилирования белков и лизосомального протеолиза плазмы в условиях экспериментального моделирования ишемии и ишемии-реперфузии // Наука молодых (Eruditio Juvenium). 2017. Т. 5, №3. С. 338-351. doi: 10.23888/HMJ20173338-351
  12. Сучков И.А., Пшенников А.С., Герасимов А.А., и др. Профилактика рестеноза в реконструктивной хирургии магистральных артерий // Наука молодых (Eruditio Juvenium). 2013. №2. С. 12-19.
  13. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Климентова Э.А., и др. Апоптоз в сосудистой патологии: настоящее и будущее // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2020. Т. 28, №1. С. 79-87. doi: 10.23888/PAVLOVJ2020 28179-87
  14. Marcus A.J., Broekman M.J., Drosopoulos J.H., et al. The endothelial cell ecto-ADPase responsible for inhibition of platelet function is CD39 // The Journal of Clinical Investigation. 1997. Vol. 99, №6. P. 1351‐1360. doi: 10.1172/JCI119294
  15. Ren X., Feng Y., Guo J., et al. Surface Modification and Endothelialization of Biomaterials as Potential Scaffolds for Vascular Tissue Engineering Applications // Chemical Society Reviews. 2015. Vol. 44, №15. P. 5680-5742. doi: 10.1039/c4cs00483c
  16. Adipurnama I., Yang M.C., Ciach T., et al. Surface modification and endothelialization of polyurethane for vascular tissue engineering applications: a review // Biomaterials Science. 2016. Vol. 5, №1. P. 22-37. doi: 10.1039/c6bm00618c
  17. Vig K., Swain K., Mlambo T., et al. Adhesion of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC) on PTFE Material Following Surface Modification by Low Temperature Plasma Treatment // Physiology. 2019. Vol. 33, №1. P. 603.3.
  18. Zhou M., Wang W.C., Liao Y.G., et al. In vitro biocompatibility evaluation of silk-fibroin/polyurethane membrane with cultivation of HUVECs // Frontiers of Materials Science. 2014. Vol. 8. P. 63-71. doi: 10.1007/s11706-014-0230-3
  19. Штанский Д.В., Глушанкова Н.А., Кирюханцев-Корнеев Ф.В., и др. Сравнительное исследование структуры и цитотоксичности политетрафторэтилена после ионного травления и ионной имплантации // Физика твердого тела. 2011. Т. 53, №3. С. 593-597.
  20. Байдамшина Д.Р., Тризна Е.Ю., Холявка М.Г., и др. Оценка генотоксичности и цитотоксичности препаратов иммобилизованного на матрице хитозана трипсина // Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2016. №3. С. 53-57.
  21. Jaffe E.A., Nachman R.L., Becker C.G., et al. Culture of Human Endothelial Cells Derived from Umbilical Veins. Identification by Morphologic and Immunologic Criteria // The Journal of Clinical Investigation. 1973. Vol. 52, №11. P. 2745-2756. doi:10. 1172/JCI107470
  22. Aslantürk Ö.S. In Vitro Cytotoxicity and Cell Viability Assays: Principles, Advantages, and Disadvantages. In: Genotoxicity – A Predictable Risk to Our Actual World. 2018. Доступно по: https://cdn. intechopen.com/pdfs/57717.pdf. Ссылка активна на 21 мая 2020. doi: 10.5772/intechopen.71923
  23. Albulescu R., Popa A.-C., Enciu A.-M., et al. Comprehensive In Vitro Testing of Calcium Phosphate-Based Bioceramics with Orthopedic and Dentistry Applications // Materials. 2019. Vol. 12, №22. P. 3704. doi: 10.3390/ma12223704
  24. Emch О., Cavicchia J., Dasi P., et al. Hemocompatibility of Various Heart Valve Materials. In: Society for Biomaterials. Annual Meeting and Exposition. Pioneering the Future of Biomaterials. Transactions of the 38th Annual Meeting. 2014. Vol. XXXVI. Art. 28. Available at: http://abstracts.biomaterials.org/data/papers/2014/0332-000967.pdf. Accessed: 2020 May 21.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Схема восстановления MTS до формазана под воздействием дегидрогеназ

Скачать (29KB)
3. Рис. 2. 96-луночный планшет с клеточным супернатантом после инкубации с MTS/PMS перед измерением оптической плотности

Скачать (101KB)
4. Рис. 3. Сравнение значений оптической плотности в исследуемых группах эксперимента по цитотоксичности

Скачать (25KB)
5. 图2 。96孔微滴板与细胞上清经MTS/PMS孵育后测量光密度

Скачать (96KB)
6. 图 3。细胞毒性实验各组光密度值的比较

Скачать (23KB)

© Калинин Р.Е., Сучков И.А., Мжаванадзе Н.Д., Короткова Н.В., Никифоров А.А., Суров И.Ю., Иванова П.Ю., Боженова А.Д., Стрельникова Е.А., 2020

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
 


Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».