Экзосомы способствуют доставке мРНК и миРНК с помощью катионных липосом 2X3-DOPE в мезенхимные клетки сердца крыс in vitro

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Обоснование. Доставка нуклеиновых кислот в мезенхимные стволовые клетки, используемые в качестве модельных объектов в экспериментах in vitro или терапевтических средств в регенеративной медицине и онкологии, — активно разрабатываемая задача. Существующие невирусные системы доставки либо недостаточно высокоэффективны, либо высокотоксичны для клеток, что требует разработки новых носителей для трансфекции мезенхимных стволовых клеток.

Цель — показать возможность доставки модельных матричных РНК и малых интерферирующих РНК в мезенхимные стволовые клетки сердца крысы in vitro при помощи оригинальных катионных липосом 2X3-DOPE (1:3 мольн.), а также оценить влияние экзосом в составе гибридных наночастиц с 2X3-DOPE на эффективность доставки РНК.

Методы. Для выделения экзосом использовали стандартную методику ультрацентрифугирования с последующей характеристикой полученных везикул методами вестерн-блоттинга, просвечивающей электронной и атомно-силовой микроскопии, измерение гидродинамического диаметра методом динамического рассеяния света. Малые интерферирующие РНК были получены в ходе химического синтеза, для получения матричных РНК использовали метод in vitro транскрипции. Комплексы липосом или гибридных наночастиц с РНК формировали путем смешивания компонентов, параметры полученных частиц оценивали методами динамического рассеяния света и атомно-силовой микроскопии. Для оценки эффективности доставки РНК в мезенхимные стволовые клетки сердца крысы из здорового и ишемизированного миокарда использовали флуоресцентную микроскопию, лазерную сканирующую конфокальную микроскопию, а также проточную цитофлуориметрию.

Результаты. Были получены и охарактеризованы комплексы катионных липосом 2X3-DOPE (1:3 мольн.) с матричной РНК и 2X3-DOPE, содержащими DSPE-PEG2000 (0,62 моль%), с малыми интерферирующими РНК, а также комплексы соответствующих гибридных наночастиц с матричной РНК или малыми интерферирующими РНК. Было показано, что катионные липосомы 2X3-DOPE малоэффективны для доставки матричной РНК в мезенхимные стволовые клетки сердца крысы, в то время как гибридные наночастицы с экзосомами на их основе демонстрируют до 40% трансфицированных клеток. Катионные липосомы 2X3-DOPE, содержащие DSPE-PEG2000, эффективны для доставки малых интерферирующих РНК в мезенхимные стволовые клетки сердца крысы (до 90% трансфицированных клеток), в то время как использование гибридных наночастиц позволяет достичь 100% трансфицированных клеток, а также более чем в два раза увеличивает содержание малых интерферирующих РНК в клетках при оценке средней интенсивности флуоресценции.

Заключение. Катионные липосомы 2X3-DOPE (1:3 мольн.), модифицированные DSPE-PEG2000 (0,62 моль%), можно рассматривать как перспективное средство доставки малых интерферирующих РНК в мезенхимные стволовые клетки как сами по себе, так и в комплексе с экзосомами. Присутствие экзосом в составе гибридных наночастиц увеличивает эффективность трансфекции мезенхимных стволовых клеток сердца крысы матричными РНК и малыми интерферирующими РНК in vitro.

Об авторах

Олеся Вячеславовна Довбыш

Национальный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова; Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого; Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева

Email: lesya.dovbysh@mail.ru
ORCID iD: 0009-0005-0924-3118
SPIN-код: 7885-7580
Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

Вера Валерьевна Высочинская

Национальный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова; Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого; Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева

Email: veravv2509@gmail.com
ORCID iD: 0000-0003-3533-2606
SPIN-код: 2662-5700

канд. биол. наук

Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

Нина Владимировна Гаврилова

Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого; Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева

Email: daughtervgater@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-7825-9130
SPIN-код: 1238-1989
Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

Павел Михайлович Докшин

Национальный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова; Институт цитологии Российской академии наук

Email: dokshin_pm@almazovcentre.ru
ORCID iD: 0000-0002-0182-009X
SPIN-код: 9896-3742

канд. биол. наук

Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

Екатерина Геннадьевна Никитина

Национальный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова

Email: purrpurr@list.ru
ORCID iD: 0009-0009-0407-3307
SPIN-код: 5903-8336
Россия, Санкт-Петербург

Александр Сергеевич Клочев

Санкт-Петербургский государственный университет

Email: klochev03@bk.ru
ORCID iD: 0009-0009-9031-6925
Россия, Санкт-Петербург

Екатерина Александровна Елпаева

Национальный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова; Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева

Email: elpaevak@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0001-8271-0003
SPIN-код: 8201-1590

канд. биол. наук

Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

Ольга Андреевна Добровольская

Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева

Email: dobrovolskaya.od@gmail.com
ORCID iD: 0000-0001-6654-1107
SPIN-код: 2915-5173
Россия, Санкт-Петербург

Елена Васильевна Шмендель

МИРЭА — Российский технологический университет

Email: elena_shmendel@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-3727-4905
SPIN-код: 7961-5774

канд. хим. наук

Россия, Москва

Михаил Александрович Маслов

МИРЭА — Российский технологический университет

Email: mamaslov@mail.ru
ORCID iD: 0000-0002-5372-1325
SPIN-код: 6451-6580

д-р хим. наук

Россия, Москва

Яна Александровна Забродская

Национальный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова; Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого; Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева

Автор, ответственный за переписку.
Email: yana@zabrodskaya.net
ORCID iD: 0000-0003-2012-9461
SPIN-код: 3907-8702

канд. физ.-мат. наук

Россия, Санкт-Петербург; Санкт-Петербург; Санкт-Петербург

Список литературы

  1. Lai JJ, Chau ZL, Chen S, et al. Exosome processing and characterization approaches for research and technology development. Adv Sci (Weinh). 2022;9(15):2103222. doi: 10.1002/advs.202103222
  2. Gupta AK, Wang T, Rapaport JA. Systematic review of exosome treatment in hair restoration: Preliminary evidence, safety, and future directions. J Cosmet Dermatol. 2023;22(9):2424–2433. doi: 10.1111/jocd.15869
  3. Familtseva A, Jeremic N, Tyagi SC. Exosomes: cell-created drug delivery systems. Mol Cell Biochem. 2019;459(1–2):1–6. doi: 10.1007/s11010-019-03545-4
  4. Cheng HL, Fu CY, Kuo WC, et al. Detecting miRNA biomarkers from extracellular vesicles for cardiovascular disease with a microfluidic system. Lab Chip. 2018;18(19):2917–2925. doi: 10.1039/c8lc00386f
  5. Kura B, Kalocayova B, Devaux Y, Bartekova M. Potential clinical implications of miR-1 and miR-21 in heart disease and cardioprotection. Int J Mol Sci. 2020;21(3):700. doi: 10.3390/ijms21030700
  6. Bellin G, Gardin C, Ferroni L, et al. Exosome in cardiovascular diseases: a complex world full of hope. Cells. 2019;8(2):166. doi: 10.3390/cells8020166
  7. Rastogi S, Sharma V, Bharti PS, et al. The evolving landscape of exosomes in neurodegenerative diseases: exosomes characteristics and a promising role in early diagnosis. Int J Mol Sci. 2021;22(1):440. doi: 10.3390/ijms22010440
  8. Welch JL, Stapleton JT, Okeoma CM. Vehicles of intercellular communication: exosomes and HIV-1. J Gen Virol. 2019;100(3):350–366. doi: 10.1099/jgv.0.001193
  9. Sims B, Farrow AL, Williams SD, et al. Tetraspanin blockage reduces exosome-mediated HIV-1 entry. Arch Virol. 2018;163(6):1683–1689. doi: 10.1007/s00705-018-3737-6
  10. Ouattara LA, Anderson SM, Doncel GF. Seminal exosomes and HIV-1 transmission. Andrologia. 2018;50(11):e13220. doi: 10.1111/and.13220
  11. Zabrodskaya Y, Plotnikova M, Gavrilova N, et al. Exosomes released by influenza-virus-infected cells carry factors capable of suppressing immune defense genes in naïve cells. Viruses. 2022;14(12):2690. doi: 10.3390/V14122690
  12. Chen CC, Liu L, Ma F, et al. Elucidation of exosome migration across the blood–brain barrier model in vitro. Cell Mol Bioeng. 2016;9(4):509–529. doi: 10.1007/s12195-016-0458-3
  13. Salarpour S, Forootanfar H, Pournamdari M, et al. Paclitaxel incorporated exosomes derived from glioblastoma cells: comparative study of two loading techniques. Daru. 2019;27(2):533–539. doi: 10.1007/s40199-019-00280-5
  14. Kim MS, Haney MJ, Zhao Y, et al. Development of exosome-encapsulated paclitaxel to overcome MDR in cancer cells. Nanomedicine. 2016;12(3):655–664. doi: 10.1016/j.nano.2015.10.012
  15. Sun D, Zhuang X, Xiang X, et al. A novel nanoparticle drug delivery system: the anti-inflammatory activity of curcumin is enhanced when encapsulated in exosomes. Mol Ther. 2010;18(9):1606–1614. doi: 10.1038/mt.2010.105
  16. Bryniarski K, Ptak W, Jayakumar A, et al. Antigen-specific, antibody-coated, exosome-like nanovesicles deliver suppressor T-cell microRNA-150 to effector T cells to inhibit contact sensitivity. J Allergy Clin Immunol. 2013;132(1):170–181. doi: 10.1016/j.jaci.2013.04.048
  17. Gong C, Tian J, Wang Z, et al. Functional exosome-mediated co-delivery of doxorubicin and hydrophobically modified microRNA 159 for triple-negative breast cancer therapy. J Nanobiotechnology. 2019;17(1):93. doi: 10.1186/s12951-019-0526-7
  18. O’Loughlin AJ, Mäger I, de Jong OG, et al. Functional delivery of lipid-conjugated siRNA by extracellular vesicles. Mol Ther. 2017;25(7):1580–1587. doi: 10.1016/j.ymthe.2017.03.021
  19. Kanada M, Bachmann MH, Hardy JW, et al. Differential fates of biomolecules delivered to target cells via extracellular vesicles. Proc Natl Acad Sci USA. 2015;112(12):E1433–E1442. doi: 10.1073/PNAS.1418401112
  20. Barrios MH, Garnham AL, Foers AD, et al. Small extracellular vesicle enrichment of a retrotransposon-derived double-stranded RNA: a means to avoid autoinflammation? Biomedicines. 2021;9(9):1136. doi: 10.3390/biomedicines9091136
  21. Wang JH, Forterre AV, Zhao J, et al. Anti-HER2 scFv-directed extracellular vesicle-mediated mRNA-based gene delivery inhibits growth of HER2-positive human breast tumor xenografts by prodrug activation. Mol Cancer Ther. 2018;17(5):1133–1142. doi: 10.1158/1535-7163.MCT-17-0827
  22. Bellavia D, Raimondo S, Calabrese G, et al. Interleukin 3- receptor targeted exosomes inhibit in vitro and in vivo chronic myelogenous leukemia cell growth. Theranostics. 2017;7(5):1333–1345. doi: 10.7150/thno.17092
  23. Lou G, Song X, Yang F, et al. Exosomes derived from miR-122-modified adipose tissue-derived MSCs increase chemosensitivity of hepatocellular carcinoma. J Hematol Oncol. 2015;8(1):122. doi: 10.1186/s13045-015-0220-7
  24. Izco M, Blesa J, Schleef M, et al. Systemic exosomal delivery of shRNA minicircles prevents parkinsonian pathology. Mol Ther. 2019;27(12):2111–2122. doi: 10.1016/j.ymthe.2019.08.010
  25. Alvarez-Erviti L, Seow Y, Yin H, et al. Delivery of siRNA to the mouse brain by systemic injection of targeted exosomes. Nat Biotechnol. 2011;29(4):341–345. doi: 10.1038/nbt.1807
  26. Lamichhane TN, Jeyaram A, Patel DB, et al. Oncogene knockdown via active loading of small RNAs into extracellular vesicles by sonication. Cell Mol Bioeng. 2016;9(3):315–324. doi: 10.1007/s12195-016-0457-4
  27. Jeyaram A, Lamichhane TN, Wang S, et al. Enhanced loading of functional miRNA cargo via pH gradient modification of extracellular vesicles. Mol Ther. 2020;28(3):975–985. doi: 10.1016/j.ymthe.2019.12.007
  28. Mondal J, Pillarisetti S, Junnuthula V, et al. Hybrid exosomes, exosome-like nanovesicles and engineered exosomes for therapeutic applications. J Control Release. 2023;353:1127–1149. doi: 10.1016/j.jconrel.2022.12.027
  29. Wu S, Yun J, Tang W, et al. Therapeutic m6 A eraser ALKBH5 mRNA-loaded exosome-liposome hybrid nanoparticles inhibit progression of colorectal cancer in preclinical tumor models. ACS Nano. 2023;17(12):11838–11854. doi: 10.1021/acsnano.3c03050
  30. Shtam TA, Kovalev RA, Varfolomeeva EY, et al. Exosomes are natural carriers of exogenous siRNA to human cells in vitro. Cell Commun Signal. 2013;11(1):88. doi: 10.1186/1478-811X-11-88
  31. Li LM, Ruan GX, HuangFu MY, et al. ScreenFect A: an efficient and low toxic liposome for gene delivery to mesenchymal stem cells. Int J Pharm. 2015;488(1–2):1–11. doi: 10.1016/j.ijpharm.2015.04.050
  32. Ito K, Suda T. Metabolic requirements for the maintenance of self-renewing stem cells. Nat Rev Mol Cell Biol. 2014;15(4):243–256. doi: 10.1038/nrm3772
  33. Clackson T. Regulated gene expression systems. Gene Ther. 2000;7(2):120–125. doi: 10.1038/sj.gt.3301120
  34. Lin Y, Wu J, Gu W, et al. Exosome–liposome hybrid nanoparticles deliver CRISPR/Cas9 system in MSCs. Adv Sci (Weinh). 2018;5(4):1700611. doi: 10.1002/advs.201700611
  35. Vysochinskaya V, Shishlyannikov S, Zabrodskaya Y, et al. Influence of lipid composition of cationic liposomes 2X3-DOPE on mRNA delivery into eukaryotic cells. Pharmaceutics. 2022;15(1):8. doi: 10.3390/pharmaceutics15010008
  36. Zabrodskaya YA, Gavrilova NV, Elpaeva EA, et al. mRNA encoding antibodies against hemagglutinin and nucleoprotein prevents influenza virus infection in vitro. Biochem Biophys Res Commun. 2024;738:150945. doi: 10.1016/j.bbrc.2024.150945
  37. Vysochinskaya V, Zabrodskaya Y, Dovbysh O, et al. Cell-penetrating peptide and cationic liposomes mediated siRNA delivery to arrest growth of chronic myeloid leukemia cells in vitro. Biochimie. 2024;221:1–12. doi: 10.1016/J.BIOCHI.2024.01.006
  38. Théry C, Amigorena S, Raposo G, Clayton A. Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids. Curr Protoc Cell Biol. 2006;Chapter 3:Unit 3.22. doi: 10.1002/0471143030.cb0322s30
  39. Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970;227(5259):680–685. doi: 10.1038/227680a0
  40. Petukhov IA, Maslov MA, Morozova NG, Serebrennikova GA. Synthesis of polycationic lipids based on cholesterol and spermine. Russian Chemical Bulletin. 2010;59(1):260–268. EDN: OBUHZH doi: 10.1007/s11172-010-0071-x
  41. Nečas D, Klapetek P. Gwyddion: an open-source software for SPM data analysis. Cent Eur J Phys. 2012;10(1):181–188. doi: 10.2478/s11534-011-0096-2
  42. Docshin PM, Karpov AA, Mametov MV, et al. Mechanisms of regenerative potential activation in cardiac mesenchymal cells. Biomedicines. 2022;10(6):1283. doi: 10.3390/biomedicines10061283
  43. Docshin PM, Karpov AA, Eyvazova ShD, et al. Activation of cardiac stem cells in myocardial infarction. Cell and Tissue Biology. 2018;12(3):175–182. EDN: YBUTMT doi: 10.1134/S1990519X18030045
  44. Sturm L, Schwemberger B, Menzel U, et al. In vitro evaluation of a nanoparticle-based mRNA delivery system for cells in the joint. Biomedicines. 2021;9(7):794. doi: 10.3390/biomedicines9070794
  45. Levy O, Zhao W, Mortensen LJ, et al. mRNA-engineered mesenchymal stem cells for targeted delivery of interleukin-10 to sites of inflammation. Blood. 2013;122(14):e23–e32. doi: 10.1182/blood-2013-04-495119
  46. Drzeniek NM, Kahwaji N, Schlickeiser S, et al. Immuno-engineered mRNA combined with cell adhesive niche for synergistic modulation of the MSC secretome. Biomaterials. 2023;294:121971. doi: 10.1016/j.biomaterials.2022.121971
  47. Nowakowski A, Andrzejewska A, Boltze J, et al. Translation, but not transfection limits clinically relevant, exogenous mRNA based induction of alpha-4 integrin expression on human mesenchymal stem cells. Sci Rep. 2017;7(1):1103. doi: 10.1038/s41598-017-01304-3
  48. Fedorovskiy AG, Antropov DN, Dome AS, et al. Novel efficient lipid-based delivery systems enable a delayed uptake and sustained expression of mRNA in human cells and mouse tissues. Pharmaceutics. 2024;16(5):684. doi: 10.3390/pharmaceutics16050684
  49. Zhang L, Qiang W, Li MQ, et al. A drug delivery system of HIF-1α siRNA nanoparticles loaded by mesenchymal stem cells on choroidal neovascularization. Nanomedicine. 2024;19(26):2171–2185. doi: 10.1080/17435889.2024.2393075
  50. Andersen MØ, Nygaard JV, Burns JS, et al. siRNA nanoparticle functionalization of nanostructured scaffolds enables controlled multilineage differentiation of stem cells. Mol Ther. 2010;18(11):2018–2027. doi: 10.1038/mt.2010.166
  51. Benoit DSW, Boutin ME. Controlling mesenchymal stem cell gene expression using polymer-mediated delivery of siRNA. Biomacromolecules. 2012;13(11):3841–3849. doi: 10.1021/bm301294n

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Характеристика внеклеточных везикул, выделенных из сыворотки крови человека: a — вестерн-блоттинг с антителами к специфическому маркерному белку экзосом HLA-I; M — маркер молекулярных масс, справа подписана электрофоретическая подвижность в кДа; EXO — исследуемый образец, стрелкой отмечено положение выявленной зоны белка; b — электронная микрофотография образца внеклеточных везикул. Длина масштабного отрезка 100 нм.

Скачать (38KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Гидродинамический диаметр исследуемых образцов, полученный методом динамического рассеяния света. EXO — экзосомы; LP — катионные липосомы 2X3-DOPE или 2X3-DOPE-PEG для матричных (мРНК) или малых интерферирующих (миРНК) соответственно; EXO-LP — гибридные наночастицы с 2X3-DOPE или 2X3-DOPE-PEG; LP/RNA — комплексы липосом и РНК; EXO-LP/RNA — комплексы гибридных наночастиц с РНК.

Скачать (64KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Топография поверхности образцов, содержащих комплексы 2X3-DOPE/мРНК и 2X3-DOPE-PEG/миРНК (левый столбец), экзосомы (средний столбец) и их гибриды (правый столбец), полученные методом атомно-силовой микроскопии. Справа от всех рисунков изображена линейка псевдоцвета, отражающая высоту частиц в нм. Длина масштабного отрезка составляет 500 нм.

Скачать (367KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Эффективность трансфекции клеток iCMC и hCMC комплексами катионных липосом 2X3-DOPE с мРНК-eGFP и комплексами гибридных наночастиц EXO-2X3-DOPE с мРНК-eGFP через 24 ч с момента трансфекции, выполненное методом проточной цитофлуориметрии. Статистическая значимость различий была определена с помощью однофакторного дисперсионного анализа с поправкой на множественное сравнение (тест Тьюки) (***p <0,0002, **p <0,0021).

Скачать (161KB)
Метаданные
6. Рис. 5. Эффективность трансфекции клеток iCMC и hCMC комплексами катионных липосом 2X3-DOPE-PEG с миРНК-JOE и комплексами гибридных наночастиц EXO-2X3-DOPE-PEG с миРНК-JOE через 24 ч с момента трансфекции, выполненное методом проточной цитофлуориметрии. Статистическая значимость различий была определена с помощью однофакторного дисперсионного анализа с поправкой на множественное сравнение (тест Тьюки) (**p <0,0021, *p <0,0332).

Скачать (178KB)
Метаданные
7. Рис. 6. Оценка эффективности трансфекции клеток iCMC (сверху) и hCMC (снизу) комплексами катионных липосом 2X3-DOPE-PEG с миРНК-JOE (слева) и комплексами гибридных наночастиц EXO-2X3-DOPE-PEG с миРНК-JOE (справа) через 24 ч с момента трансфекции, выполненное методом флуоресцентной микроскопии. Ядра клеток окрашены Hoechst 33342 (синий), миРНК мечена JOE (желтый). Длина масштабного отрезка составляет 150 мкм.

Скачать (1022KB)
Метаданные
8. Рис. 7. Оценка интернализации исследуемых комплексов в iCMC (сверху) и hCMC (снизу) через 24 ч с момента трансфекции, выполненное методом лазерной сканирующей конфокальной микроскопии. Ядра окрашены DAPI (синий), миРНК мечена JOE (зеленый), актиновый цитоскелет Alexa Fluor 680 фаллоидин (красный). Длина масштабного отрезка составляет 50 мкм.

Скачать (675KB)
Метаданные

© Эко-Вектор, 2025

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License.

Согласие на обработку персональных данных с помощью сервиса «Яндекс.Метрика»

1. Я (далее – «Пользователь» или «Субъект персональных данных»), осуществляя использование сайта https://journals.rcsi.science/ (далее – «Сайт»), подтверждая свою полную дееспособность даю согласие на обработку персональных данных с использованием средств автоматизации Оператору - федеральному государственному бюджетному учреждению «Российский центр научной информации» (РЦНИ), далее – «Оператор», расположенному по адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А, со следующими условиями.

2. Категории обрабатываемых данных: файлы «cookies» (куки-файлы). Файлы «cookie» – это небольшой текстовый файл, который веб-сервер может хранить в браузере Пользователя. Данные файлы веб-сервер загружает на устройство Пользователя при посещении им Сайта. При каждом следующем посещении Пользователем Сайта «cookie» файлы отправляются на Сайт Оператора. Данные файлы позволяют Сайту распознавать устройство Пользователя. Содержимое такого файла может как относиться, так и не относиться к персональным данным, в зависимости от того, содержит ли такой файл персональные данные или содержит обезличенные технические данные.

3. Цель обработки персональных данных: анализ пользовательской активности с помощью сервиса «Яндекс.Метрика».

4. Категории субъектов персональных данных: все Пользователи Сайта, которые дали согласие на обработку файлов «cookie».

5. Способы обработки: сбор, запись, систематизация, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), извлечение, использование, передача (доступ, предоставление), блокирование, удаление, уничтожение персональных данных.

6. Срок обработки и хранения: до получения от Субъекта персональных данных требования о прекращении обработки/отзыва согласия.

7. Способ отзыва: заявление об отзыве в письменном виде путём его направления на адрес электронной почты Оператора: info@rcsi.science или путем письменного обращения по юридическому адресу: 119991, г. Москва, Ленинский просп., д.32А

8. Субъект персональных данных вправе запретить своему оборудованию прием этих данных или ограничить прием этих данных. При отказе от получения таких данных или при ограничении приема данных некоторые функции Сайта могут работать некорректно. Субъект персональных данных обязуется сам настроить свое оборудование таким способом, чтобы оно обеспечивало адекватный его желаниям режим работы и уровень защиты данных файлов «cookie», Оператор не предоставляет технологических и правовых консультаций на темы подобного характера.

9. Порядок уничтожения персональных данных при достижении цели их обработки или при наступлении иных законных оснований определяется Оператором в соответствии с законодательством Российской Федерации.

10. Я согласен/согласна квалифицировать в качестве своей простой электронной подписи под настоящим Согласием и под Политикой обработки персональных данных выполнение мною следующего действия на сайте: https://journals.rcsi.science/ нажатие мною на интерфейсе с текстом: «Сайт использует сервис «Яндекс.Метрика» (который использует файлы «cookie») на элемент с текстом «Принять и продолжить».