ISSN (print): 2313-1829, ISSN (online): 2500-2562 Учредители: Институт стволовых клеток человека, Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины имени академика Ю.М. Лопухина ФМБА, ООО «Эко-Вектор» Главный редактор: Лагарькова Мария Андреевна, член-корреспондент РАН, д-р биол. наук, профессор Периодичность / доступ: 4 выпуска в год / открытый Входит в: Белый список (3 уровень), РИНЦ, Scopus, Embase
Направляя рукопись статьи для публикации в данном журнале, авторы соглашаются со следующим: авторы сохраняют за собой авторские права на произведение и предоставляют издателю исключительную лицензию на публикацию и распространение произведения; авторы сохраняют за собой право на распространение произведения в соответствии с условиями политики самоархивирования, принятой в журнале (см. подробнее); направляемая авторами в редакцию рукопись будет принята к публикации только по решению редакционной коллегии и главного редактора — в соответствии с правилами отбора контента в данном журнале (см. подробнее); опубликованное в журнале произведение будет распространяться в печатном и электронном виде по подписке или на условиях открытого доступа по лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International (CC BY-NC-ND 4.0) — по решению издателя или в соответствии с отдельным договором издателя с авторским коллективом. Передаваемая авторами исключительная лицензия позволяет издателю использовать произведение следующими способами: воспроизведение статьи или ее отдельной части, а также метаданных статьи на русском и иностранных языках в любой материальной форме, в том числе на бумажном и электронном носителе в виде отдельного произведения в журналах и/или базах данных (локальных или в сети Интернет) издателя и/или иных лиц, по усмотрению издателя; распространение статьи или ее отдельной части, а также метаданных статьи на русском и иностранных языках на любом носителе в составе журнала и/или базах данных издателя или иных лиц, по усмотрению издателя, или в виде самостоятельного произведения по всему миру на условиях открытого доступа или за плату без выплаты вознаграждения авторам; доведение статьи или отдельной ее части, а также метаданных статьи на русском и иностранных языках до всеобщего сведения таким образом, что любое лицо может получить доступ к статье из любого места и в любое время по собственному выбору (в том числе через Интернет); выдача разрешения/ий на использование статьи или ее отдельных частей, а также метаданных статьи на русском и иностранных языках третьим лицам с уведомлением автора об этом путем размещения соответствующей информации на сайте журнала без выплаты вознаграждения автору; переработка, в том числе перевод статьи на иностранные языки, и использование переработанной (переведенной) статьи вышеуказанными способами; Иные права, прямо не переданные издателю авторами, включая патентные права на любые процессы, способы или методы и прочее, описанные авторами в статье, а также права на товарные знаки, сохраняются за авторами. ПОЛНЫЙ ТЕКСТ АВТОРСКОГО ДОГОВОРА (ОФЕРТЫ) — СКАЧАТЬ ПРОЧИТАТЬ Авторское соглашение (публичная оферта) о публикации статьи в научном журнале «Гены и Клетки» ООО «Эко-Вектор» в лице генерального директора Щепина Евгения Валентиновича, действующего на основании Устава (далее — Издатель), с одной стороны, предлагает неопределенному кругу лиц (далее — Автор), с другой стороны, далее совместно именуемым Стороны, заключить настоящее соглашение (далее — Соглашение) о публикации результатов интеллектуальной деятельности в форме научного произведения (далее – Статья) в журнале «гены и Клетки» (далее — Журнал) на нижеуказанных условиях. I. Общие положения Настоящее Соглашение, в соответствии с п. 2 ст. 437 Гражданского кодекса РФ, является публичной офертой (далее — Оферта), полным и безоговорочным принятием (акцептом), которой, в соответствии со ст. 438 Гражданского кодекса РФ, считается отправка Автором своего произведения путем загрузки его в сетевую электронную систему подачи рукописей, размещенную в соответствующем разделе сайта Журнала в информационно-телекоммуникационной сети «Интернет» (далее — Интернет). В соответствии с действующим законодательством РФ в части соблюдения авторского права на электронные информационные ресурсы, материалы сайта, электронного журнала не могут быть воспроизведены полностью или частично в любой форме (электронной или печатной) без предварительного письменного согласия Автора и редакции Журнала, (которое, при опубликовании Статьи в открытом доступе, может быть выражено путем размещения соответствующего разрешения — открытой лицензии Creative Commons — в соответствующем разделе сайта Журнала (по месту размещения публикуемых материалов) в сети Интернет). При разрешенном использовании опубликованного произведения в контексте других документов обязательна ссылка на первоисточник. II. Термины, используемые в Соглашении Автор – физическое лицо (лица), творческим трудом которого создана Рукопись научной статьи или представитель авторского коллектива, уполномоченный представлять его интересы. Рукопись статьи — результат интеллектуальной деятельности в форме научного произведения, содержащего текст, графические и числовые данные, аудиовизуальную информацию, программный код и иные элементы, представленный Автором для публикации в Журнале. Акцепт Оферты – полное и безоговорочное принятие Оферты на условиях, указанных в пункте 3 Соглашения (автор проводит акцепт Оферты путем отправки Заявки Издателю – загрузки Рукописи статьи, дополнительных файлов и сопроводительных материалов в сетевую электронную систему подачи рукописей, размещенную в соответствующем разделе сайта Журнала в сети Интернет). Журнал – научный рецензируемый журнал, зарегистрированный как средство массовой информации в реестре Федеральной службы по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзора). Заявка – электронное обращение Автора к Издателю на публикацию Статьи в Журнале посредством загрузки Рукописи статьи, дополнительных файлов и сопроводительных материалов в сетевую электронную систему подачи рукописей, размещенную в соответствующем разделе сайта Журнала в сети Интернет). Издатель – ООО "Эко-Вектор", являющееся учредителем и издателем Журнала. Метаданные Статьи – информация о Рукописи статьи и/или Статье, предназначенная для включения в Международные Научные Базы Данных (МНБД), а именно: название статьи; сведения об авторах (фамилия, имя, отчество автора (авторов) полностью, место работы каждого автора с указанием почтового адреса, контактная информация (email), идентификаторы МНБД для каждого автора; аннотация; ключевые слова; тематический рубрикатор: УДК либо другие библиотечно-библиографические классификационные и предметные индексы; библиографический список (список ссылок). Оферта – настоящий документ (предложение Автору подать Заявку и опубликовать Статью путем размещения ее на сайте Журнала в сети Интернет). Публикация – размещение Статьи в Журнале. Статья – Рукопись статьи, прошедшая процесс рецензирования и редакционно-издательской обработки. Редакция Журнала – творческий коллектив, осуществляющий подготовку Журнала к выпуску. Стороны – Автор и Издатель. Требования к рукописям – требования к публикуемым в Журнале материалам (их оформлению, структуре, содержанию, оригинальности, этичности), размещенные в разделе «Авторам» сайта Журнала в сети Интернет. III. Предмет Соглашения (Оферты) По настоящему соглашению Автор предоставляет Издателю на безвозмездной основе на весь срок действия исключительных прав, предусмотренный законодательством РФ, исключительную лицензию на использование созданной Автором Статьи для опубликования в Журнале, а также права на использование Статьи, следующими способами: воспроизведение Статьи или ее отдельной части, а также метаданных Статьи на русском и иностранных языках в любой материальной форме, в том числе на бумажном и электронном носителе в виде отдельного произведения в журналах и/или базах данных (локальных или в сети Интернет) Издателя и/или иных лиц, по усмотрению Издателя; распространение Статьи или ее отдельной части, а также метаданных статьи на русском и иностранных языках на любом носителе в составе Журнала и/или базах данных Издателя или иных лиц, по усмотрению Издателя, или в виде самостоятельного произведения по всему миру на условиях открытого доступа или за плату без выплаты вознаграждения Автору; доведение Статьи или отдельной ее части, а также метаданных статьи на русском и иностранных языках до всеобщего сведения таким образом, что любое лицо может получить доступ к Статье из любого места и в любое время по собственному выбору (в том числе через Интернет); выдача разрешения/ий на использование Статьи или ее отдельных частей, а также метаданных статьи на русском и иностранных языках третьим лицам с уведомлением Автора об этом путем размещения соответствующей информации на сайте Журнала без выплаты вознаграждения Автору; переработка, в том числе перевод Статьи на иностранные языки, и использование переработанной (переведенной) Статьи вышеуказанными способами; иные права, прямо не переданные Издателю по настоящему Соглашению, включая патентные права на любые процессы, способы или методы и прочее, описанные Автором в Статье, а также права на товарные знаки, сохраняются за Автором. Территория, на которой допускается использование прав на Статью – весь мир. Действие условий настоящего Соглашения, обязывающих Издателя опубликовать Статью, а также предоставляющих Издателю и Автору право использовать Статью в пределах, установленных Соглашением, возникает только в случае принятия Статьи к публикации в Журнале. Моментом принятия Статьи к публикации в Журнале является момент отправки уведомления о принятии Статьи к публикации Автору с официальной электронной почты Журнала. Права предоставляются Автором Издателю безвозмездно, и публикация Статьи в Журнале не влечет никаких финансовых отчислений Автору. В случае принятия Редакцией Журнала решения об отклонении Заявки, отказе в опубликовании Статьи в Журнале, снятии Статьи с публикации (ретракции) настоящее Соглашение утрачивает силу. Решение об отказе в опубликовании направляется Автору по адресу электронной почты, указанной в Заявке. IV. Права и обязанности Сторон Автор гарантирует: что он является законным обладателем/распорядителем прав на переданные в составе Рукописи статьи материалы; что права, предоставленные Издателю по настоящему Соглашению, не передавались ранее и не будут передаваться третьим лицам; что Рукопись статьи содержит все предусмотренные действующим законодательством об авторском праве ссылки на цитируемых авторов и/или произведения (материалы); что Автором получены все необходимые разрешения на используемые в Рукописи статьи результаты, факты и иные заимствованные материалы, правообладателем/распорядителем которых Автор не является; что Рукопись статьи не содержит материалы, не подлежащие опубликованию в открытой печати в соответствии с действующими законодательными актами РФ, и ее опубликование и распространение не приведут к разглашению секретной (конфиденциальной) информации (включая государственную тайну); что Автор проинформировал других соавторов относительно условий этого Соглашения и получил согласие всех соавторов на заключение настоящего Соглашения на условиях, предусмотренных Соглашением. Автор обязуется: вносить в Рукопись статьи изменения в соответствии с «Правилами для авторов», указанным на сайте Журнала, и рекомендациями редакции; не использовать в коммерческих целях и в других изданиях без согласия Издателя электронную копию Статьи, подготовленную Издателем; В процессе подготовки Рукописи статьи к публикации Автор обязуется: вносить в текст Рукописи статьи исправления, рекомендованные рецензентами и принятые Редакцией Журнала, и/или, при необходимости, по требованию Издателя и Редакции доработать Рукопись статьи; своевременно (в указанные Редакцией сроки) осуществлять проверку и согласование внесенной в Рукопись статьи редакторской правки (в том числе — отвечать на вопросы редакторов), и вычитку сверстанной Статьи (оригинал-макета в PDF); на этапе вычитки сверстанной Статьи предлагать к внесению только тот минимум исправлений, который связан с необходимостью устранения допущенных фактических ошибок. Автор имеет право: пользоваться печатными или электронными допечатными версиями неопубликованной Статьи в форме и содержании, принятыми Издателем для публикации в Журнале. Такие допечатные версии могут быть размещены в виде электронных файлов на веб-сайтах Автора (соавторов) или на защищенных внешних веб-сайтах работодателей Автора Статьи, но не для коммерческих продаж или систематического внешнего распространения третьей стороной. При этом Автор (соавторы) должен: включить в допечатную версию следующее предупреждение: «Это допечатная версия статьи, принятой к публикации в (название Журнала), ©, Эко-Вектор, год.»; указать электронную ссылку на сайт Издателя URL: https://journals.eco-vector.com/ безвозмездно копировать или передавать коллегам копию опубликованной Статьи целиком или частично для их личного или профессионального некоммерческого использования, для продвижения результатов академических или научных исследований или для информационных целей работодателя Автора. использовать материалы из опубликованной Статьи в написанной кем-либо из соавторов книге или ином непериодическом научной или учебном издании. использовать отдельные рисунки, таблицы и фрагменты текста из Статьи в собственных целях обучения или для включения их в другую работу, издаваемую (в печатном или электронном формате) третьей стороной, или для представления в электронном формате во внутренней компьютерной сети или на публичном веб-сайте Автора (соавторов) или его работодателя. включать материалы Статьи в учебные сборники для безвозмездного распространения Статьи студентам Автора (соавторов) или сохранять Статью в электронном формате на локальном сервере для доступа студентов, как к части курса обучения, а также для внутренних обучающих программ в учреждении работодателя Автора. Издатель обязуется: опубликовать в печатной и электронной форме Статью Автора в Журнале в соответствии с условиями настоящего Соглашения; по решению Редакции Журнала, в случае необходимости, предоставить Автору сверстанную Статью и внести обоснованную правку Автора; предоставить Автору неограниченный по времени доступ к электронной версии опубликованной Статьи через личный кабинет Автора на сайте журнала со дня выхода соответствующего выпуска Журнала в свет; соблюдать предусмотренные действующим законодательством права Автора, а также осуществлять их защиту и принимать все необходимые меры для предупреждения нарушения авторских прав третьими лицами. Издатель имеет право: проводить экспертизу Рукописи статьи и предлагать Автору внести необходимые изменения, до выполнения которых Статья не будет опубликована в Журнале; осуществлять техническое и литературное редактирование Рукописи статьи, не изменяющее ее (основное содержание); при любом последующем разрешенном использовании Автором (и/или иными лицами) Журнала и/или Статьи (в том числе любой ее отдельной части, фрагмента) требовать от указанных лиц указания ссылки на Журнал, Издателя, Автора или иных обладателей авторских прав, название Статьи, номер выпуска Журнала и год опубликования, указанные в Журнале; размещать в СМИ и других информационных источниках предварительную и/или рекламную информацию о предстоящей публикации Статьи; вносить изменения в Оферту в установленном Офертой порядке. Редакции Журнала, возглавляемой главным редактором, принадлежат исключительные права отбора и/или отклонения материалов, публикуемых в Журнале. Рукопись статьи, направляемая Автором в Редакцию Журнала, возврату не подлежит. Редакция Журнала не вступает в переписку по вопросам отклонения Заявки. Во всех случаях, не оговоренных и не предусмотренных в настоящем Соглашении, Стороны обязаны руководствоваться действующим законодательством Российской Федерации. V. Акцепт Оферты и заключение Соглашения. Срок действия Соглашения Автор производит Акцепт Оферты посредством отправки Заявки Издателю через сетевую электронную систему подачи рукописей, размещенную в соответствующем разделе сайта Журнала в сети Интернет. Акцепт Оферты Автором создает Соглашение, заключенное в письменной форме (статьи 438 и 1286.1 Гражданского Кодекса РФ) на условиях Оферты. Настоящее Соглашение действует в течение всего срока действия исключительных прав на Статью. При передаче (отчуждении) исключительного права на Статью Автором третьему лицу действие настоящего Соглашения не прекращается. VI. Порядок изменения и расторжения Соглашения Издатель вправе в одностороннем порядке изменять условия настоящего Соглашения, предварительно, не менее чем за 10 (десять) календарных дней до вступления в силу соответствующих изменений, известив об этом Автора через сайт Журнала или путем направления извещения посредством электронной почты на адрес электронной почты Автора, указанный в Заявке Автора. Изменения вступают в силу с даты, указанной в соответствующем извещении. В случае несогласия Автора с изменениями условий настоящего Соглашения Автор вправе направить Издателю письменное уведомление об отказе от настоящего Соглашения путем загрузки уведомления в сетевую электронную систему подачи рукописей, размещенную в соответствующем разделе сайта Журнала в сети Интернет) или направления уведомления на официальный адрес электронной почты Редакции в сети Интернет) Настоящее Соглашение может быть расторгнуто досрочно: по соглашению Сторон в любое время; по иным основаниям, предусмотренным настоящим Соглашением. Автор вправе в одностороннем порядке отказаться от исполнения настоящего Соглашения, направив Издателю соответствующее уведомление в письменной форме не менее чем за 60 (шестьдесят) календарных дней до предполагаемой даты публикации Статьи Автора в Журнале. Прекращение срока действия Соглашения по любому основанию не освобождает Стороны от ответственности за нарушения условий Соглашения, возникшие в течение срока его действия. VII. Ответственность За неисполнение или ненадлежащее исполнение своих обязательств по Соглашению Стороны несут ответственность в соответствии с действующим законодательством РФ. Все сведения, предоставленные Автором, должны быть достоверными. Автор отвечает за достоверность и полноту передаваемых им Издателю сведений. При использовании недостоверных сведений, полученных от Автора, Издатель не несет ответственности за негативные последствия, вызванные его действиями на основании предоставленных недостоверных сведений. В отношении содержания Статьи Автор самостоятельно несет всю ответственность за соблюдение требований законодательства РФ о рекламе, о защите авторских и смежных прав, об охране товарных знаков и знаков обслуживания, о защите прав потребителей. Издатель не несет никакой ответственности по Соглашению: за какие-либо действия, являющиеся прямым или косвенным результатом неправомерных действий Автора; за какие-либо убытки Автора вне зависимости от того, мог ли Издатель предвидеть возможность таких убытков или нет. Стороны освобождаются от ответственности за нарушение условий Соглашения, если такое нарушение вызвано действием обстоятельств непреодолимой силы (форс-мажор), включая действия органов государственной власти (в т.ч. принятие правовых актов), пожар, наводнение, землетрясение, другие стихийные бедствия, отсутствие электроэнергии и/или сбои работы компьютерной сети, забастовки, гражданские волнения, беспорядки, любые иные обстоятельства. VIII. Порядок разрешения споров Споры и разногласия будут решаться Сторонами путем переговоров, а в случае недостижения согласия – в соответствии с действующим законодательством Российской Федерации. При наличии неурегулированных разногласий Сторон споры разрешаются в суде по месту нахождения Издателя в соответствии с действующим законодательством Российской Федерации. IX. Прочие условия Любые уведомления, сообщения, запросы, и т.п. (за исключением документов, которые должны быть направлены в виде подлинных оригиналов в соответствии с законодательством РФ) считаются полученными Автором, если они были переданы (направлены) Издателем через сайт Журнала (в том числе путем публикации), по электронной почте и по другим каналам связи, указанным в Заявке. Стороны признают юридическую силу уведомлений, сообщений, запросов и т.п., переданных (направленных) указанными выше способами. В случае предъявления к Издателю требований, связанных с нарушением исключительных авторских и иных прав интеллектуальной собственности третьих лиц при создании Статьи или в связи с заключением Автором настоящего Соглашения, а также в связи с использованием Издателем Статьи в соответствии с Соглашением, Автор обязуется: немедленно, после получения уведомления Издателя, принять меры к урегулированию споров с третьими лицами, при необходимости вступить в судебный процесс на стороне Издателя и предпринять все зависящие от него действия с целью исключения Издателя из числа ответчиков; возместить Издателю понесенные судебные расходы, расходы и убытки, вызванные применением мер обеспечения иска и исполнения судебного решения, и выплаченные третьему лицу суммы за нарушение исключительных авторских и иных прав интеллектуальной собственности, а также иные убытки, понесенные Издателем в связи с несоблюдением Автором гарантий, предоставленных ими по настоящему Соглашению X. Юридический адрес и реквизиты Издателя ООО «Эко-Вектор» Адрес: 191186, город Санкт-Петербург, переулок Аптекарский, д. 3 литер А, помещение 1Н ИНН: 7806423692; КПП: 784101001; ОГРН: 1099847039907.
Прогрессирующая оссифицирующая фибродисплазия: молекулярно-генетические причины, клинико-морфологическая характеристика и терапевтические подходы к лечению
Прогрессирующая оссифицирующая фибродисплазия — это крайне редкое наследственное заболевание с распространённостью примерно 1 случай на 1,5–2,0 млн человек. Основная причина болезни заключается в мутации гена ACVR1, который кодирует одноименный рецептор, участвующий в регуляции остеогистогенеза. Наиболее распространённый генетический вариант — однонуклеотидная замена 617G>A (R206H, rs121912678), приводящая к замене аминокислоты аргинина на гистидин. Этот вариант наблюдается более чем у 95% всех зарегистрированных пациентов с прогрессирующей оссифицирующей фибродисплазией. Мутация нарушает внутриклеточную передачу сигналов, что приводит к патологическому формированию гетеротопической костной ткани в мышцах, сухожилиях и связках. Клиническая картина заболевания может варьироваться: у некоторых пациентов наблюдаются дополнительные симптомы, предположительно связанные с редкими мутациями в других доменах рецептора ACVR1. Несмотря на активные исследования, точные клетки-предшественники, ответственные за патологический остеогенез, до сих пор не идентифицированы. Учёные предполагают, что в процесс вовлечены несколько типов клеток, включая мезенхимальные стволовые клетки и эндотелиальные клетки. В настоящее время эффективного лечения прогрессирующей оссифицирующей фибродисплазии не существует, что подчёркивает необходимость поиска новых терапевтических мишеней. Перспективным направлением является генная терапия, успешно применяемая при других моногенных заболеваниях. Несколько экспериментальных подходов, включая таргетные ингибиторы сигнального пути ACVR1, находятся на стадии доклинических и клинических испытаний.
© Эко-Вектор, 2025 https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
Паракринные эффекты мезенхимальных клеток: перспективы развития
Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) представляют собой клеточную популяцию, способную к саморепликации и дифференцировке в различные типы соматических клеток. В обзоре рассмотрен потенциал культур МСК для клеточной терапии на основе трансплантируемых клеток или тканево-инженерных конструктов, а также секретируемых МСК паракринных факторов. Методологические аспекты применения описываемых клеток для лечения различных заболеваний в клинических и доклинических исследованиях продемонстрированы на примерах экспериментальной терапии с разбором их основных механизмов. В качестве основы для клеточной терапии МСК вызывают значительный интерес из-за их доступности и возобновляемой природы. Несмотря на то, что пути дифференцировки МСК не до конца изучены, сами клетки играют ключевую роль в биологии стволовых клеток из-за их регуляторных свойств, включая иммуномодулирующие, антиапоптотические, пропролиферативные и антифибротические эффекты. Мы подчёркиваем, что в первую очередь именно паракринные возможности МСК обеспечивают преимущества их оптимальной интеграции в ткани по сравнению с индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками, особенно в тканевой инженерии сердечной ткани. В обзоре также освещается влияние внешних факторов, таких как субстраты, на эффективность паракринного эффекта МСК с целью выявления оптимального клеточного микроокружения для улучшения терапевтических результатов без побочных эффектов.
© Эко-Вектор, 2025 https://eco-vector.com/for_authors.php#07
Новая экспериментальная in vitro модель болезни Вильсона–Коновалова на основе человеческих клеток дефинитивной эндодермы
Обоснование. Болезнь Вильсона–Коновалова представляет собой редкое аутосомно-рецессивное заболевание, вызванное мутациями в гене ATP7B, который кодирует медь-транспортирующую АТФазу. Нарушение функции этого белка приводит к сбою в выведении меди через желчь, что вызывает её патологическое накопление в гепатоцитах. В настоящее время спектр доступных клеточных моделей для изучения молекулярных основ этой патологии и поиска новых терапевтических подходов значительно ограничен. Цель. Разработка in vitro модели на основе индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека для изучения молекулярных механизмов болезни Вильсона–Коновалова и скрининга терапевтических стратегий. Методы. Мы создали 2D-клеточную модель на основе клеток дефинитивной эндодермы здорового донора, используя валидированные нами индуцированные плюрипотентные клетки с последующей дифференцировкой индукторами активином А и CHIR99021. Перегрузку медью, характерную для патогенеза болезни Вильсона–Коновалова, имитировали путём внесения экзогенной меди в ростовую среду. Для оценки относительной выживаемости клеток применяли краситель Alamar Blue. Результаты. Использованная линия индуцированных плюрипотентных стволовых клеток демонстрирует нормальный кариотип; морфологию, характерную для эмбриональных стволовых клеток; экспрессирует маркёры плюрипотентных клеток SOX2, OCT4, TRA-1-60 и SSEA-4 и формирует ткани всех трёх зародышевых листков при спонтанной дифференцировке в эмбриоидных тельцах. Дифференцировка данных индуцированных плюрипотентных стволовых клеток по предлагаемой методике приводит к получению клеток дефинитивной эндодермы с соответствующей морфологией, которые экспрессируют маркёры SOX17, FOXA2 и ATP7B. Полученная модель демонстрирует чувствительность к перегрузке экзогенной медью с IC50 197 мкМ. Заключение. Созданная платформа на основе человеческих клеток дефинитивной эндодермы, полученных из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток здорового донора, позволяет моделировать перегрузку меди in vitro, имитируя нарушение клеточного метаболизма при болезни Вильсона–Коновалова. Таким образом, предлагаемая модель может быть использована как для фундаментальных исследований, так и для разработки новых терапевтических подходов.
Усиление регенеративных свойств мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток через модуляцию в них аутофагии на модели острой лучевой болезни
Обоснование. Миелоидная ткань относится к числу радиочувствительных тканей и является одной из первичных структур, поражаемых при воздействии ионизирующего излучения. Повреждение миелоидной ткани проявляется угнетением кроветворения, истощением пула гемопоэтических стволовых клеток и нарушением стромальных компонентов костного мозга. Одним из перспективных подходов к восстановлению гемопоэза при острой лучевой болезни является использование мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК). Благодаря своим свойствам формировать «нишу» для гемопоэтических стволовых клеток, секретировать гемопоэтические факторы, оказывать иммуносупрессивное действие ММСК рассматривают как эффективное средство клеточной терапии, особенно при аллогенной трансплантации. Однако эффективность применения ММСК ограничена их низкой жизнеспособностью и функциональной активностью после трансплантации. Таким образом, повышение регенераторного потенциала ММСК является ключевой задачей. Одним из возможных подходов к решению этой задачи может стать модуляция аутофагии в ММСК. Цель. Изучить влияние модуляции аутофагии в ММСК на их функциональную активность и способность стимулировать регенерацию миелоидной ткани на модели острой лучевой болезни. Методы. ММСК выделяли из хориона плаценты мышей линии ICR (CD1), культивировали с активатором аутофагии сиролимусом и ингибитором аутофагии 3-метиладенином. In vitro оценивали жизнеспособность клеток, концентрацию белков аутофагии: Beclin-1 и LC3B, а также секрецию гемопоэтических факторов роста: SCF (фактор роста стволовых клеток, stem cell factor), G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, granulocyte colony-stimulating factor), FLT3 ligand (лиганд fms-подобной тирозинкиназы 3, Fms-related tyrosine kinase 3 ligand). In vivo проводили моделирование острой лучевой болезни с последующей трансплантацией ММСК лабораторным животным. Далее выполняли анализ костного мозга и показателей крови на 7-е сутки после облучения. Результаты. Активация аутофагии сиролимусом увеличивала концентрацию гемопоэтических факторов роста: SCF — на 70,5%, G-CSF — на 59,6% и FLT3 ligand — на 62,3% (p ≤ 0,0001). Трансплантация ММСК с активированной аутофагией способствовала более выраженному увеличению клеточности в гранулоцитарном (+4,5%, p = 0,026), лимфоцитарном (+18,8%, p < 0,0001), мегакариоцитарном (+30,5%, р = 0,011) ростках. Ингибирование аутофагии снижало секрецию факторов роста и нивелировало терапевтический эффект ММСК. Заключение. Активация аутофагии в ММСК представляет собой перспективный подход для восстановления гемопоэза на модели острой лучевой болезни.
Липополисахарид-индуцированное депрессивно-подобное состояние и нейровоспаление: дифференциальное влияние на гиппокамп и префронтальную кору у диких мышей
Обоснование. Введение липополисахарида (LPS) мышам является широко используемой моделью для изучения депрессии, ассоциированной с воспалением. Однако механизмы, лежащие в основе вызываемых LPS изменений в мозге, остаются недостаточно изученными. Цель. Целью данного исследования было изучение поведенческих, клеточных и молекулярных изменений, индуцированных интервальным введением LPS, в двух ключевых для патогенеза депрессии областях мозга — гиппокампе и префронтальной коре. Методы. Исследование проведено на взрослых самцах диких мышей (n = 28, возраст 2–3 мес, масса тела 25–35 г), а также на первичных культурах глиальных клеток. Дизайн эксперимента включал введение LPS в дозе 1 мг/кг (3 инъекции внутрибрюшинно) в два этапа с 7-дневным интервалом. На первом этапе эксперимента оценивали поведенческие показатели, на втором проводили забор тканей (префронтальная кора и целый гиппокамп) для молекулярного и гистологического анализа. Для оценки поведения использовали тест «Открытое поле» (общая активность и тревожность), тест подвешивания за хвост, тест предпочтения сахарозы (ангедония) и Y-образный лабиринт (пространственная рабочая память). Первичные культуры клеток глии инкубировали в присутствии LPS — для индуцирования нейровоспаления и фактора роста фибробластов 2 (fibroblast growth factor, FGF2) — для оценки изменения фенотипа микроглиальных клеток. Молекулярные и клеточные изменения in vivo и in vitro анализировали с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени и методов иммуногистохимии. Результаты. Введение LPS вызвало у мышей депрессивно-подобное поведение, включая снижение интереса к гедоническому стимулу, увеличение времени нахождения в неподвижном состоянии, снижение общей двигательной активности и нарушения памяти. Воспалительная реакция сопровождалась повышенной экспрессией провоспалительных цитокинов (TNF-α, IL-1β) в селезёнке и головном мозге, при этом выявлены региональные различия в активации астроцитов и микроглии. У мышей, получавших LPS, наблюдали увеличение экспрессии белка плотных контактов 1 (tight junction protein 1, TJP1), фактора роста эндотелия сосудов A и E-селектина, снижение экспрессии клаудина 3, окклюдина, FGF2 и значительное повышение количества тучных клеток. В обоих отделах мозга отмечалась активация микроглии, сопровождающаяся увеличением доли амёбоидных форм клеток. В гиппокампе выявлены изменения глутаматергической передачи, включая снижение экспрессии глутаматного транспортера GLT-1 и глутаминсинтетазы, что указывает на нарушение механизмов буферизации глутамата. В экспериментах in vitro LPS индуцировал активацию микроглии, которая была нивелирована добавлением FGF2. Заключение. Нейровоспаление, вызванное введением LPS, по-разному повлияло на гиппокамп и префронтальную кору, при этом гиппокамп демонстрировал бóльшую уязвимость. Обнаруженный нейропротекторный эффект FGF2 в отношении LPS-индуцированной активации микроглии указывает на его потенциальную роль в терапии депрессии, ассоциированной с воспалением.
Возможность биоинформатического определения микросателлитной нестабильности при полнотранскриптомном анализе образцов опухолей прямой и толстой кишки
Обоснование. Статус микросателлитной нестабильности опухоли (microsatellite instability/microsatellite stability, MSI/MSS) является важным параметром, определяющим как прогноз её развития, так и потенциал ответа на иммунотерапию. Пациенты направляются на MSI-типирование в соответствии с показаниями, однако только небольшая часть пациентов имеет эти показания. Поэтому и большинство наборов данных секвенирования, доступных в репозиториях и собираемых локально, не будут по умолчанию содержать информацию об MSI в метаданных. Особенности финансирования проектов и количество собираемого биоматериала также не всегда позволяют выделить ДНК и использовать её для типирования на MSI методами полимеразной цепной реакции. Результаты секвенирования РНК опухолевой ткани также могут использоваться для определения MSI-статуса, но для этого необходимо включение в протокол полнотранскриптомного анализа опухолей биоинформатического инструмента для определения MSI. Цель. Оценить наличие и применимость биоинформатических инструментов по определению статуса MSI на локальной выборке полных транскриптомов опухолей прямой и толстой кишки. Методы. Для анализа отбирали находящиеся в свободном доступе биоинформатические инструменты, предназначенные для оценки MSI-статуса по данным секвенирования РНК, которые затем протестировали на локальной выборке полных транскриптомов опухолей толстой и прямой кишки от 13 пациентов после резекции первичной опухоли. Оценивали число соматических мутаций как суррогатный маркёр статуса MSI/MSS, статуса MSI/MSS по результатам тестирования биоинформатических инструментов, а также их корреляцию. Результаты. Нами опробованы биоинформатические инструменты PreMSIm и MIRACLE, предназначенные для определения MSI-статуса по транскриптомным данным. При использовании MIRACLE нестабильность повторов выявлена у трёх из 13 образцов. Статус MSI, определённый MIRACLE, коррелирует с мутационной нагрузкой (в среднем 2163 мутации в образцах с MSI и 122,9 — с MSS) и позволяет определить образцы как нестабильные. PreMSIm выявил MSI также в 3 образцах, однако его результаты показали ограниченную согласованность с мутационной нагрузкой. Для двух из трёх образцов с высокой мутационной нагрузкой выявлены известные патогенные и возможно патогенные варианты в генах MSH2 и MLH1, вызывающие синдром Линча и подтверждающие MSI-статус. Для одного из образцов мы предположили спорадическую природу MSI из-за гиперметилирования гена MLH1. Заключение. Инструменты PreMSIm и MIRACLE определяют MSI-статус с разной чувствительностью и специфичностью относительно мутационной нагрузки как суррогатного маркёра MSI/MSS в аденокарциноме толстой и прямой кишки. Инструмент MIRACLE технически легко встраивается в протокол полнотранскриптомного анализа опухоли, позволяет получать биологически правдоподобную оценку статуса MSI/MSS, коррелирующую с мутационной нагрузкой опухоли по данным транскриптомного анализа.
Нокаут гена Psme1 снижает пролиферацию эмбриональных стволовых клеток мыши, не влияя на уровни активных форм кислорода
Обоснование. Эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) представляют собой уникальные клетки, полученные из эпибласта ранних преимплантационных эмбрионов млекопитающих. Они обладают способностью к неограниченному делению в культуре и сохранению недифференцированного состояния. Потенциал к дифференцировке в любые клеточные типы делает ЭСК важным инструментом в регенеративной медицине. Кроме того, они используются при изучении механизмов эмбрионального развития и моделировании заболеваний. Поддержание плюрипотентности и направленной дифференцировки ЭСК зависит от строго регулируемых клеточных процессов, включая деградацию белков через убиквитин-протеасомную систему. Нарушения в работе убиквитин-протеасомной системы могут приводить к выходу ЭСК из состояния плюрипотентности или к апоптозу. Известно, что регуляторная частица протеасом PA28αβ, состоящая из α- и β-субъединиц, кодируемых генами Psme1 и Psme2, играет ключевую роль в этих процессах, особенно в условиях окислительного стресса. Показано, что на ранних этапах дифференцировки в ЭСК мыши происходит увеличение экспрессии PA28αβ, а нокдаун α-субъединицы приводит к накоплению карбонилированных белков, что указывает на участие PA28αβ в ранних этапах дифференцировки ЭСК. Однако функции PA28αβ в поддержании плюрипотентности ЭСК остаются недостаточно изученными. Цель. Определить влияние нокаута гена Psme1, кодирующего α-субъединицу регулятора протеасомы PA28αβ, на пролиферацию ЭСК мыши и накопление активных форм кислорода (АФК). Методы. В исследовании с помощью геномного редактирования была создана линия ЭСК мыши с нокаутом гена Psme1. Способность к дифференцировке in vivo оценивали методом тератомного анализа. Экспрессию маркёров плюрипотентности в ЭСК определяли методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени и иммуноблоттинга. Проведён также анализ клеточной пролиферации и продукции АФК с помощью проточной цитофлуориметрии. Результаты. Получена линия ЭСК мыши с нокаутом гена Psme1. Анализ экспрессии ключевых маркёров плюрипотентности не выявил статистически значимых различий между контрольными и мутантными ЭСК. Тератомный анализ подтвердил сохранение плюрипотентного статуса ЭСК с нокаутом гена Psme1, продемонстрировав их способность к дифференцировке в производные всех трёх зародышевых листков: эктодерму, мезодерму и энтодерму. При этом скорость пролиферации мутантных ЭСК была снижена по сравнению с контрольными клетками, тогда как уровень АФК оставался неизменным. Заключение. ЭСК мыши с нокаутом гена Psme1 сохраняют плюрипотентность и способность дифференцироваться в производные всех трёх зародышевых листков in vivo. Хотя нокаут гена α-субъединицы регулятора PA28αβ не изменяет уровень АФК, он приводит к снижению темпов пролиферации, что подчёркивает важную роль PA28αβ в поддержании пролиферативного потенциала ЭСК.
Оценка влияния кверцетина и дигидрокверцетина на поведение и биомаркеры клеточного старения мезенхимных стволовых/стромальных клеток пожилых пациентов
Обоснование. Накопление сенесцентных клеток в тканях и органах человека снижает способность тканей к обновлению и нормальному функционированию, что влияет на старение организма в целом и способствует развитию возраст-ассоциированных заболеваний. Избирательная элиминация сенесцентных клеток с помощью сенолитиков может быть потенциальным терапевтическим подходом в профилактике таких заболеваний. Цель. Главной целью исследования являлось изучение воздействия перспективных сенолитиков (кверцетина и дигидрокверцетина) на свойства сенесцентных мезенхимных стволовых/стромальных клеток (сМСК), полученных от пожилых доноров. Методы. Проведены тесты, оценивающие такие характеристики и аспекты поведения клеток, как экспрессия маркёров клеточного старения, апоптоз, активность митохондрий и секреторная активность. В работе использованы следующие методы исследования: световая микроскопия, флуоресцентная микроскопия, полимеразная цепная реакция в реальном времени с обратной транскрипцией, прижизненная съёмка, XTT-тест, иммуноцитохимический и иммуноферментный анализ. Результаты. В гетерогенной популяции первично выделенных сМСК, полученных от пожилых пациентов, преобладают клетки с маркерами клеточного старения (активность β-галактозидазы; экспрессия p21; секреторный фенотип, ассоциированный со старением) по сравнению с контролем — МСК от молодых доноров. Добавление сенолитиков к сМСК может способствовать изменению функциональных свойств этих клеток, включая снижение экспрессии р21 и продукции компонентов секреторного фенотипа, ассоциированного со старением. По данным иммуноцитохимического анализа экспрессии маркера сенесцентности клеток p21, среднее значение эффективности элиминации составило 20,35% для кверцетина и 57,36% для дигидрокверцетина. При этом статистически значимое изменение содержания компонентов секреторного фенотипа, ассоциированного со старением (ингибитор активатора плазминогена 1-го типа, интерлейкин 6, моноцитарный хемотаксический протеин-1) в кондиционированной среде сМСК под воздействием сенолитиков наблюдали только в случае дигидрокверцетина. Заключение. Полученные результаты демонстрируют, что при добавлении кверцетина статистически значимо повышается частота апоптоза в культуре сМСК по сравнению с интактными сМСК, и это подтверждает его сенолитические свойства. В то же время дигидрокверцетин не вызывает индукцию апоптоза и поддерживает жизнеспособность клеток. Таким образом, дигидрокверцетин скорее демонстрирует свойства сеноморфика — вещества, способствующего изменению фенотипа сенесцентной клетки в исходное состояние.