Suppression of Aseptic Inflammation Reduces the Severity of Remodeling of the Pulmonary Artery Branches and Improves Progressing of Experimental Chronic Thromboembolic Pulmonary Hypertension

全文:

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ИГХ – иммуногистохимическое исследование

ИЛ – интерлейкин

ЛС – легочный ствол

ЛЖ – левый желудочек

ПЖ – правый желудочек

СДПЖ – систолическое давление в правом желудочке

ТЭЛА – тромбоэмболия легочной артерии

ФНО-α – фактор некроза опухоли альфа

ФУ – фракция укорочения

ХТЭЛГ – хроническая тромбоэмболическая легочная гипертензия

ЭХО-КГ – эхокардиографическое исследование

TAPSE – систолическая экскурсия кольца трикуспидального клапана

Vmax – максимальная линейная скорость потока

ВВЕДЕНИЕ

Хроническая тромбоэмболическая легочная гипертензия (ХТЭЛГ) является одним из наиболее тяжелых осложнений тромбоэмболии легочной артерии (ТЭЛА) и характеризуется стабильным повышением давления в легочной артерии и нарушением лизиса тромбоэмболов [1]. Повышенное давление в легочной артерии приводит к быстрому ремоделированию правого желудочка (ПЖ) и сосудов малого круга кровообращения, сердечной недостаточности и в конечном итоге к смерти [2]. Несмотря на развитие хирургических подходов к лечению ХТЭЛГ, таких как легочная эндартерэктомия (PEA) и баллонная легочная ангиопластика, значительное число пациентов остается неоперабельными, или эффект от проведенного хирургического лечения недостаточен [3]. В этой связи консервативные подходы к лечению ХТЭЛГ имеют существенное значение. В настоящее время в качестве ЛАГ-специфических препаратов используются вазодилататоры малого круга кровообращения [2]. Однако даже при лечении ЛАГ-специфическими препаратами средняя пятилетняя выживаемость пациентов с неоперабельной ХТЭЛГ остается на уровне 53–69% [4, 5]. Поэтому более глубокое понимание патогенеза ХТЭЛГ могло бы способствовать разработке новых терапевтических стратегий.

Современные концепции утверждают, что ХТЭЛГ – это двойное сосудистое заболевание со стенозом, фиброзными сетями и окклюзиями в легочных артериях большого и среднего размера в области, где располагался тромбоэмбол. Кроме того, отмечается формирование вторичной микроваскулопатии, затрагивающей преимущественно мелкие резистивные сосуды [6]. Характерными морфологическими признаками ремоделирования сосудистого русла при ХТЭЛГ в крупных сосудах является наличие организованных тромбов, атеросклеротических бляшек, разрушения эластических волокон медии. В мелких сосудах гистологическая картина близка к изменениям при легочной артериальной гипертензии: отмечается гипертрофия медии, формирование неоинтимы, плексиформных изменений, расширение различных типов анастомозов [7]. Одним из ключевых неблагоприятных факторов ремоделирования сосудистого русла вне зависимости от диаметра является отложение коллагена [8]. Фиброзирование сосудистой стенки приводит к увеличению ее жесткости, что, в свою очередь, ведет к повышению легочного сосудистого сопротивления и значительному ухудшению прогноза. При этом в целом ряде недавних исследований было показано наличие асептического воспаления как в стенке ветвей легочной артерии, так и периваскулярно [9, 10]. Кроме того, в тканях и плазме крови при ХТЭЛГ изменяется паракринный профиль. Многие исследования показывают повышение провоспалительных цитокинов в плазме крови, таких как интерлейкин ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, фактор некроза опухоли альфа (ФНО-α), трансформирующий фактор роста бета (TGFβ) [11, 12], С-реактивный белок и моноцитарный хемоаттрактантный белок-1 (MCP-1/CCL2) [13]. Некоторые исследования отметили увеличение концентрации CXCL9, CXCL13 [12], CCL3 (MIP-1α), CCL-5 (RANTES), CXCL10 (IP-10 (IFNγ-индуцируемый белок 10)) [14]. В большинстве исследований отмечено увеличение вазоконстриктора эндотелина-1 (ET-1) как показателя эндотелиальной дисфункции [15]. Также отмечено значительное увеличение экспрессии молекул клеточной адгезии лейкоцитов и эндотелиальных клеток VCAM-1, ICAM-1 [16].

Однако роль этого воспаления в формировании и прогрессировании ХТЭЛГ неизвестна и требует дальнейшего изучения.

Цель исследования: изучить влияние асептического воспаления на формирование и прогрессирование ХТЭЛГ.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Животные

В работе было использовано 54 крысы-самцы стока Wistar конвенциональной категории массой 223 ± 38 г. Все животные содержались в стандартизированных условиях вивария барьерного типа, имели неограниченный доступ к полнорационному гранулированному корму и воде.

Эмболизирующие частицы

В качестве эмболизирующих частиц были использованы частично биодеградируемые микросферы, полученные из ультрачистого альгината натрия (Sigma-Aldrich, США) с помощью электростатического инкапсулятора B-390 (Buchi, Швейцария). В качестве стабилизирующего агента использовали 2%-ный раствор хлорида бария. Целевой размер частиц – 180 ± 30 мкм. Все микросферы производились в стерильных условиях.

Расчет дозы преднизолона

Преднизолон вводился крысам в двух вариантах: низкая доза – 1.5 мг/кг и высокая доза – 6 мг/кг. С учетом разницы метаболических процессов это соответствует 0.25 мг/кг и 1 мг/кг для человека [17]. Доза для животного (мг/кг) рассчитывалась как произведение дозы для человека (мг/кг) и коэффициента преобразования (k), где k для крыс составляет 6 [18].

Дизайн исследования

В основной экспериментальной серии было использовано 44 животных. Для моделирования ТЭЛА микросферы в объеме 50 мкл были суспензированы в 1 мл физиологического раствора и вводились в хвостовую вену 8 раз с интервалом в 4 дня. После этого все животные случайным образом были разделены на следующие группы:

• Контрольная ХТЭЛГ (к.ХТЭЛГ) (n = 10) – животным сразу после последнего введения микросфер внутримышечно вводился физиологический раствор ежедневно в течение 6 недель.
• Низкая доза преднизолона (НД) (n = 10) – по аналогичному протоколу внутримышечно вводился преднизолон в дозе 1.5 мг/кг/сутки.
• Высокая доза преднизолона (ВД) (n = 11) – внутримышечно вводился преднизолон в дозе 6 мг/кг/сутки.
• Здоровые животные (Интакт) (n = 10).

Через 6 недель после последнего введения микросфер выполнялись следующие исследования: тредмил-тест, эхокардиографическое исследование (ЭХО-КГ), измерение систолического давления в ПЖ (СДПЖ) путем катетеризации, гистологические исследования легких (рис. 1).

 

Рис. 1. Дизайн исследования.

 

Отдельная серия экспериментов была выполнена для иммуногистохимического исследования. Целью этого анализа стала оценка выраженности воспалительной инфильтрации сосудистой стенки и перифокальной зоны, определение ее клеточного состава, а также влияния преднизолона на эту инфильтрацию. В исследование было включено 10 животных. Моделирование ХТЭЛГ производилось по ранее описанному протоколу. После этого все выжившие животные были разделены на 3 группы:

• Контрольная ХТЭЛГ (к.ХТЭЛГ) (n = 2) – животным сразу после последнего введения микросфер внутримышечно вводился физиологический раствор ежедневно в течение 6 недель.
• Применение глюкокортикостероида (n = 3) – сразу после последнего введения микросфер внутримышечно вводился преднизолон в дозе 1.5 мг/кг/сутки ежедневно в течение 6 недель.
• Здоровые животные (n = 3).

Тредмил-тест

Оценка толерантности к физической нагрузке выполнялась с помощью аппарата Treadmill LE8710 (Harvard Apparatus, США). В ходе исследования производилось градиентное увеличение каждые 30 с скорости вращения ленты: с 5 м/мин до 40 м/мин. Регистрировалась пройденная каждым животным дистанция (м).

Эхокардиографическое исследование

ЭХО-КГ выполнялось с помощью ультразвуковой установки высокого разрешения MyLab One Touch SL 3116 (Esaote; Италия) с сосудистым линейным датчиком (частота – 13 МГц, глубина сканирования – 2 см). Животные были наркотизированы изофлураном, подававшимся ингаляционно с помощью SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System (Kent Scientific, Torrington, CT, США). Ключевыми параметрами оценки были: диаметр легочного ствола (мм), максимальная скорость потока в легочной артерии (м/с), диаметр выносящего тракта ПЖ (мм), максимальная скорость потока в выносящем тракте ПЖ (м/с), систолическая экскурсия кольца трикуспидального клапана (TAPSE) (мм), частота сердечных сокращений (ЧСС), конечный диастолический размер левого желудочка (ЛЖ) (мм), конечный систолический размер ЛЖ (мм), фракция укорочения (ФУ) ЛЖ.

Катетеризация сердца с манометрией

Перед катетеризацией сердца животные были наркотизированы по протоколу, идентичному с проведением ЭХО-КГ. Животные располагались на термостатируемом столике TCAT-2LV Animal Temperature Controller (Physitemp Instruments Inc., США). Искусственная вентиляция легких осуществлялась с помощью аппарата SAR – 830/AP (CWE Inc., США). Параметры вентиляции: частота дыхания – 60/мин, дыхательный объем – 3 мл/100 г массы тела. Измерение СДПЖ выполнялось с помощью пункции верхушки.

Гистологическое и иммуногистохимическое исследования

Перед гистологическим исследованием животные были эвтаназированы путем передозировки изофлурана. Нижняя доля правого легкого была использована для гистологического и иммуногистохимического исследований. Она была разделена на 4 равные части. Срезы изготавливались толщиной 3–5 мкм и окрашивались методом Пикро – Маллори, специфичным к соединительной ткани. Анализ проводился в двух дистальных срезах легкого во всех идентифицированных сосудах, принадлежащих к ветвям легочной артерии. Исследование препаратов выполнялось с помощью микроскопа Eclipse Ni-U (Nikon, Япония) при увеличении от ×10 до ×40. Результаты микроскопии оценивали с помощью программного обеспечения Nis Elements Br4 (Nikon, Япония) и ImageJ (Wayne Rasband, США). В качестве критериев оценки ремоделирования легочных артерий были использованы следующие показатели: индекс гипертрофии сосудистой стенки, рассчитанный как отношение площади сосудистой стенки к площади всего сосуда в поперечном сечении в процентах, и процент коллагеновых волокон в структуре сосудистой стенки.

Для иммуногистохимического исследования использовалась поливалентная система визуализации EnVision FLEX, High pH (Dako, Дания). Для оценки воспалительной инфильтрации выявлялись маркеры: СD45 (общелейкоцитарный антиген, RTU, Dako, Дания), СD68 (моноциты/макрофаги, RTU, Dako, Дания), CD3 (Т-лимфоциты, RTU, Dako, Дания), CD20 (В-лимфоциты, RTU, Dako, Дания). Подсчет иммунных клеток осуществлялся с помощью наложения на микрофотографию сосуда сетки со стороной ячейки 32 мкм (площадь ячейки 1024 мкм²). Для каждого сосуда произвольно выбиралось 5 ячеек, захватывающих стенку сосуда и периваскулярную область. В выбранных зонах рассчитывалось количество меченых клеток с последующим определением среднего содержания клеток для каждого сосуда.

Анализ данных

Анализ полученных данных производился с помощью пакета программного обеспечения Statistica 10.0 (StatSoft; США), GraphPad Prism (Dotmatics; США). Данные представлены в виде медианы, 25-го и 75-го процентилей (Me [Q1; Q3]). Учитывая небольшие размеры выборки и ненормальное распределение, различия проанализированы с использованием непараметрических тестов. Критерий Краскела – Уоллиса использован для определения общих различий между группами по всем протестированным конечным точкам. Парные сравнения между группами выполнены с использованием непараметрического U-критерия Манна – Уитни. Различия считали значимыми при p < 0.05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Выживаемость животных

В основной серии экспериментов при введении микросфер смертность в группах моделирования ХТЭЛГ составила 6.8% (3 животных). Причинами смерти животных во всех случаях была острая правожелудочковая недостаточность и парадоксальная эмболия с развитием острой недостаточности мозгового кровообращения. В последующие 6 недель потерь животных не было (рис. 2).

В дополнительной серии, выполненной с целью иммуногистохимического исследования, смертность составила 2 животных. Причины смерти не отличались от основной серии.

 

Рис. 2. Схема потерь экспериментальных животных в основной серии. CTEPH – хроническая тромбоэмболическая легочная гипертензия, MS – микросферы, RV – правый желудочек, Saline – физиологический раствор.

 

Эхокардиографическое исследование

По данным ЭХО-КГ в группе к.ХТЭЛГ было выявлено значимое снижение TAPSE по сравнению с группой здоровых животных (p < 0.001). В группах, получавших преднизолон, значимого снижения систолической функции ПЖ не отмечалось (рис. 3a). В группе НД было выявлено снижение Vmax легочного ствола по сравнению со здоровыми животными (р = 0.02) (рис. 3b). По другим показателям значимых различий между исследуемыми группами получено не было (табл. 1).

 

Рис. 3. Результаты неинвазивных тестов. (a – b) – результаты эхокардиографического исследования. (a) – систолическая экскурсия кольца трикуспидального клапана (ТAPSE). (b) – максимальная линейная скорость потока (Vmax) в легочном стволе (ЛС). (c) – пройденная дистанция по данным тредмил-теста. Int – группа здоровых животных, c.CTEPH – группа контрольной хронической тромбоэмболической легочной гипертензии, LD – низкая доза преднизолона, HD – высокая доза преднизолона.

 

Таблица 1. Результаты эхокардиографического исследования

Параметры	Интакт.	к.ХТЭЛГ	НД	ВД
Диаметр ЛС (мм)	3.04 [2.92; 3.13]	2.88 [2.82; 3.03]	2.98 [2.58; 3.54]	3.05 [2.85; 3.3]
Диаметр ВТПЖ (мм)	3.82 [3.11; 3.93]	3.74 [3.54; 3.81]	3.43 [3.35; 3,6]	3.61 [3.54; 3.78]
Vmax ВТПЖ (м/с)	2.67 [2.46; 2.78]	2.79 [2.62; 3.24]	2.75 [2.55; 2.89]	2.72 [2.56; 2.88]
ЧСС (в мин)	363 [335; 377]	366 [351; 394]	374 [369; 385]	365 [336; 396]
ФУ ЛЖ (%)	54.5 [49.4; 61.2]	48.3 [46.4; 53,4]	51.7 [48.0; 58.9]	49.7 [47.8; 51.7]

Интакт. – группа здоровых животных, к.ХТЭЛГ – группа контрольной хронической тромбоэмболической легочной гипертензии, НД – низкая доза преднизолона, ВД – высокая доза преднизолона, ЛС – легочный ствол, Vmax – максимальная линейная скорость потока, ВТПЖ – выносящий тракт правого желудочка, ЧСС – частота сердечных сокращений, ЛЖ – левый желудочек, ФУ – фракция укорочения.

 

Тредмил-тест

По данным тредмил-теста толерантность к физической нагрузке в группах к.ХТЭЛГ и ВД была значимо ниже, чем у здоровых животных (p < 0.001). Напротив, в группе НД не было выявлено значимого снижения пройденной дистанции по сравнению со здоровыми животными (p = 0.11) (рис. 3b).

Катетеризация сердца с манометрией

По данным катетеризации сердца СДПЖ во всех экспериментальных группах было значимо выше по сравнению с группой здоровых животных (р < 0.05). При этом отмечалась тенденция (p = 0.05) к снижению СДПЖ в группе НД по сравнению с к.ХТЭЛГ (рис. 4).

 

Рис. 4. Систолическое давление в правом желудочке (RVSP) по данным катетеризации сердца. INT – группа здоровых животных, c.CTEPH – группа контрольной хронической тромбоэмболической легочной гипертензии, LD – низкая доза преднизолона, HD – высокая доза преднизолона.

 

Гистологическое исследование

По данным гистологического исследования процент коллагеновых волокон в сосудистой стенке в исследуемых группах составил: к.ХТЭЛГ – 10.6 [5.8; 15.9]%, НД – 6.6 [4.1; 10.4]%, ВД – 5.4 [3.3; 11.2]%, в группе здоровых животных – 3.9 [1.4; 6.5]%. Было выявлено значимое повышение этого показателя в группах к.ХТЭЛГ и НД по сравнению со здоровыми животными (p < 0.001 и p = 0.031 соответственно). При этом как в группе НД, так и в группе ВД отмечалось снижение процента коллагеновых волокон по сравнению с группой к.ХТЭЛГ (p = 0.001 и р < 0.001 соответственно). Значимых различий между группами НД и ВД выявлено не было (рис. 5a – d).

 

Рис. 5. Результаты гистологического исследования. (a – b) – репрезентативные микрофотографии сосудов: (a) – окрашивание по методу Пикро – Маллори; (b) – выбор границ сосудов с помощью ImageJ (Wayne Rasband, США); (c) – номинальный процент фиброза сосудистой стенки на репрезентативных микрофотографиях; (d) – процент коллагеновых волокон в структуре сосудистой стенки ветвей легочной артерии в исследуемых группах; (e) – индекс гипертрофии сосудистой стенки. Одно деление = 100 мкм. INT – группа здоровых животных, c.CTEPH – группа контрольной хронической тромбоэмболической легочной гипертензии, LD – низкая доза преднизолона, HD – высокая доза преднизолона.

 

Индекс гипертрофии сосудистой стенки в группе к.ХТЭЛГ 30.6 [24.8; 35.1]% был выше, чем в группе здоровых животных 25.4 [20.7; 30.2]% (p = 0.036). Значимых различий в группах НД 24.0 [20.6; 28.7]% и ВД 26.6 [21.7; 45.3]% по сравнению со здоровыми животными выявлено не было. Кроме того, в группе НД этот показатель был ниже, чем в группах ВД и к.ХТЭЛГ (p < 0.001) (рис. 5e). В просвете части ветвей легочной артерии диаметром 100–250 мкм обнаруживались нерастворенные микросферы, что указывало на частично сохранявшуюся обструкцию сосудистого русла.

По данным иммуногистохимического исследования общее количество лейкоцитов (СD45+ клетки) и отдельно количество макрофагов (СD68+ клетки), а также Т-лимфоцитов (CD3+ клетки) в группе к.ХТЭЛГ было выше, чем в группе здоровых животных (р < 0.001) и в группе ГКС (р < 0.001) (рис. 6a – b). Значимых различий по всем указанным маркерам между группами ГКС и здоровыми животными выявлено не было. При анализе количества В-лимфоцитов (СD20+ клетки) отмечалась та же тенденция: в группе к.ХТЭЛГ количество позитивных клеток было выше, чем в группе здоровых животных (р = 0.008) и в группе ГКС (р < 0.001). Однако было выявлено значимое снижение В-лимфоцитов в группе ГКС по сравнению со здоровыми животными (р = 0.026) (рис. 6d).

 

Рис. 6. Результаты иммуногистохимического исследования для оценки воспалительной инфильтрации сосудистой стенки и перифокальной области. (a) – репрезентативные микрофотографии иммуногистохимических препаратов в группах к.ХТЭЛГ и ГКС: верхний ряд – окрашивание на СD20 (В-лимфоциты), нижний ряд – окрашивание на СD68 (моноциты / макрофаги). Позитивные клетки маркированы ярким коричневым окрашиванием мембран. (b – e) – среднее количество позитивных клеток в анализируемых ячейках для каждого сосуда. (b) – СD45 (общелейкоцитарный антиген); (c) – СD68 (моноциты / макрофаги), (d) – СD3 (Т-лимфоциты); (e) – СD20 (В-лимфоциты). Одно деление = 50 мкм. Int – группа здоровых животных, c.CTEPH – группа контрольной хронической тромбоэмболической легочной гипертензии, PSL – группа применения низкой дозы преднизолона.

 

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Основным результатом этого исследования стала выявленная способность преднизолона путем подавления асептического воспаления снижать выраженность ремоделирования ветвей легочной артерии.

В данном исследовании использовалась модель ХТЭЛГ, основанная на введении частично биодеградируемых микросфер из альгината натрия, в связи с тем, что она позволяет наиболее точно моделировать патогенез этой патологии у крыс [19]. Более того, в группе к.ХТЭЛГ были достигнуты все критерии моделируемой патологии [1]: стабильное повышение СДПЖ, остаточная обструкция сосудистого русла, снижение толерантности к физической нагрузке, выраженное ремоделирование ветвей легочной артерии, что свидетельствует об эффективности выбранного протокола моделирования. В сосудистой стенке и периваскулярном пространстве ветвей легочной артерии в группе к.ХТЭЛГ обнаруживалась значимая воспалительная инфильтрация с преимущественным содержанием СD68+ клеток (макрофаги). Эти данные согласуются с ранее опубликованными результатами, где использовался материал, полученный от пациентов с ХТЭЛГ [10].

С учетом того, что в настоящее время не существует препаратов для лечения ХТЭЛГ, которые использовались бы непосредственно для подавления асептического воспаления и связанного с ним фиброза [20, 21], в качестве эталона коррекции иммунной гиперреактивности в этом исследовании был выбран преднизолон в двух различных дозах: низкой дозе (1.5 мг/кг/сутки, что соответствует 0.25 мг/кг/сутки у человека) и высокой (6 мг/кг/сутки, что соответствует 1 мг/кг/сутки у человека). Иммуносупрессивное действие глюкокортикостероидов, в том числе преднизолона, обусловлено как супрессией генов, кодирующих провоспалительные цитокины (ФНО-α, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM–CSF), ИЛ-8), хемокины (CCL1, CCL5, CXCL8) и молекулы адгезии (ICAM-1, VCAM-1), так и активацией транскрипции противовоспалительных белков, таких как аннексин-1, β2-адренорецептор, ингибитор ядерного фактора κB (IκB-α), секреторная лейкопротеаза (SLPI), митоген-активируемая киназа фосфатаза-1 (MKP-1). В дальнейшем MKP-1 действует как ингибитор на пути МАР-киназы, необходимой для стабилизации мРНК таких цитокинов, как ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-α, GM–CSF, COX-2 [22].

В настоящем исследовании применение преднизолона оказывало влияние как на ремоделирование сосудов малого круга кровообращения, так и на функциональные показатели, такие как толерантность к физической нагрузке и систолическая функция ПЖ. Кроме того, отмечалось значимое снижение воспалительной инфильтрации сосудистой стенки и периваскулярного пространства.

При использовании низкой дозы преднизолона (1.5 мг/кг/сутки) отмечалось снижение индекса гипертрофии и процента коллагеновых волокон в сосудистой стенке ветвей легочной артерии по сравнению с к.ХТЭЛГ. По данным ЭХО-КГ, в отличие от группы к.ХТЭЛГ, не было отмечено снижения систолической функции ПЖ, оцененной с помощью TAPSE, однако наблюдалось снижение Vmax легочного ствола по сравнению со здоровыми животными. Данное изменение потребует уточнения в дальнейших исследованиях. Толерантность к физической нагрузке у животных из этой группы была наибольшая из всех опытных групп и значимо не отличалась от группы здоровых животных.

В группе применения высокой дозы преднизолона (6 мг/кг/сутки) было выявлено положительное влияние на процент коллагеновых волокон в структуре сосудистой стенки, этот показатель значимо не отличался от здоровых животных. Однако, в отличие от группы применения низких доз преднизолона, не было выявлено значимого снижения индекса гипертрофии по сравнению с группой к.ХТЭЛГ. Это, вероятнее всего, связано с тем, что высокие дозы преднизолона могут способствовать повышению давления в малом круге кровообращения за счет неиммунного механизма, как это происходит и в большом круге кровообращения. Подтверждением этого служат ранее опубликованные данные. Так, в статье Chapados с соавт. на модели асфиксии-реоксигенации новорожденных поросят продемонстрировано увеличение давления в легочной артерии после применения гидрокортизона в дозировке 1 мг/кг через 2 ч после его перорального введения. Авторы указали, что это связано с влиянием гидрокортизона на изменения уровня эндотелина-1, но не на NO, пероксинитрит, MMP-2 или MMP-9 [23]. Более того, похожий эффект глюкокортикостероидов был показан в работе Gluskowski с соавт. в ходе клинических исследований преднизолона на пациентах со 2-й или 3-й стадией саркоидоза [24]. Также косвенным подтверждением этого служит отсутствие снижения СДПЖ в группе высоких доз преднизолона по сравнению с к.ХТЭЛГ, в то время как в группе применения низких доз преднизолона отмечалась тенденция к снижению этого показателя (р = 0.054). На фоне использования высоких доз преднизолона отсутствовало отрицательное действие на уровень TAPSE, что положительно отличало эту группу от к.ХТЭЛГ. Однако толерантность к физической нагрузке, в отличие от группы НД, была снижена по сравнению со здоровыми животными.

Среди ранее опубликованных работ существует лишь несколько исследований, посвященных тестированию глюкокортикостероидов при лечении ХТЭЛГ. Kerr с соавт. [25] применили короткий курс метилпреднизолона непосредственно перед легочной тромбэндартерэктомией для предотвращения острого повреждения легких. Было продемонстрировано снижение уровней ИЛ-6 и ИЛ-8 наряду с увеличением ИЛ-10 в плазме крови, а также снижение ИЛ-1 и ИЛ-6 в бронхоальвеолярном лаваже через сутки после операции. Однако эти молекулярные изменения не повлияли на частоту острого повреждения легких.

В настоящем исследовании преднизолон, используемый в низкой дозе, эффективно подавлял воспалительную инфильтрацию сосудистой стенки и периваскулярного пространства, уменьшал выраженность ремоделирования ветвей легочной артерии не только за счет ограничения гипертрофии сосудистой стенки, но и за счет подавления отложения коллагена. Таким образом, была продемонстрирована существенная роль асептического воспаления в патогенезе развития и прогрессирования ХТЭЛГ. Полученные данные могут быть использованы при разработке новых подходов в лечении данной патологии.

ВКЛАДЫ АВТОРОВ

А. А. Карпов – разработка концепции и дизайна исследования, статистический анализ и интерпретация данных, участие в написании рукописи и проверка критически важного интеллектуального содержания, окончательное утверждение для публикации. А. А. Крылов – анализ и интерпретация данных гистологического исследования. Л. А. Шиленко – проведение тредмил-теста, инвазивное измерение гемодинамики, анализ и интерпретация данных, участие в написании рукописи. А. М. Михайлова, Д. Д. Ваулина – изготовление эмболизирующих частиц, участие в их внутривенном введении, статистический анализ данных, участие в написании рукописи. Д. Ю. Ивкин, Н. П. Исакова – статистический анализ и интерпретация данных, участие в написании рукописи. А. В. Воротилов – проведение тредмил-теста, инвазивное измерение гемодинамики, анализ и интерпретация данных. Н. Ю. Семенова, В. А. Цинзерлинг – проведение иммуногистохимического исследования, анализ и интерпретация данных. М. М. Галагудза – разработка концепции и дизайна исследования, участие в написании рукописи и проверка критически важного интеллектуального содержания, окончательное утверждение для публикации.

ФИНАНСИРОВАНИЕ РАБОТЫ

Данная работа финансировалась за счет гранта Российского научного фонда № 23–75–10122 https://rscf.ru/project/23–75–10122/. Никаких дополнительных грантов на проведение или руководство данным конкретным исследованием получено не было.

СОБЛЮДЕНИЕ ЭТИЧЕСКИХ СТАНДАРТОВ

Эксперименты с животными проводились в соответствии с международными рекомендациями по проведению биомедицинских исследований с лабораторными животными и были одобрены Комиссией по этике Санкт-Петербургского государственного химико-фармацевтического университета Министерства здравоохранения РФ (протокол БЭК СПХФУ Rats-02.2019–5 от 12 февраля 2019 г.).

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы данной работы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

作者简介

А. Karpov

Almazov National Medical Research Centre; Saint-Petersburg State Chemical and Pharmaceutical University; Saint-Petersburg Electrotechnical University "LETI"

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg; Saint-Petersburg; Saint-Petersburg

А. Krylov

Almazov National Medical Research Centre; Herzen State Pedagogical University of Russia

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg; Saint-Petersburg

L. Shilenko

Almazov National Medical Research Centre

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg

А. Mihailova

Almazov National Medical Research Centre

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg

D. Vaulina

Almazov National Medical Research Centre

编辑信件的主要联系方式.
Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg

D. Ivkin

Saint-Petersburg State Chemical and Pharmaceutical University

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg

N. Isakova

Herzen State Pedagogical University of Russia

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg

A. Vorotilov

Almazov National Medical Research Centre

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg

N. Semenova

Almazov National Medical Research Centre

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg

V. Zinserling

Almazov National Medical Research Centre

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg

М. Galagudza

Almazov National Medical Research Centre

Email: uplavice@gmail.com
俄罗斯联邦, Saint-Petersburg

参考

补充文件