Применение протеомного анализа для идентификации фармацевтической субстанции панкреатина в целях создания стандартного образца

Введение. Панкреатин является препаратом выбора для заместительной терапии экзокринной недостаточности поджелудочной железы и представляет собой полиферментный комплекс поджелудочной железы свиньи.

Принимая во внимания современные международные требования в сфере стандартизации лекарственных средств (ЛС), для обеспечения надлежащего контроля их качества используются физические, физико-химические и биологические методы анализа, отличающиеся высокой специфичностью и чувствительностью, которые предусматривают применение стандартных образцов (СО).

Одним из основных разделов испытаний в рамках процедуры аттестации СО, в том числе биологического происхождения, является подтверждение их структуры различными взаимодополняющими методами, такими как масс-спектрометрия, высокоэффективная жидкостная хроматография, иммуноферментный анализ, электрофорез и др.

Полученные нами результаты доказали, что протеомный анализ в сочетании с хроматомасс-спектрометрией (ХМСМ) позволяют достоверно идентифицировать панкреатин и создавать на основе исследованной субстанции СО.

Цель исследования: идентификация субстанции панкреатина с применением протеомного анализа в сочетании с ХМСМ в целях создания СО.

Материал и методы. Объект исследования – фармацевтическая субстанция панкреатина. Метод протеомного анализа включал в себя подтверждение структуры исследуемого образца методом ХМСМ после электрофоретического фракционирования белков в полиакриламидном геле с последующим ферментативным гидролизом (трипсинолизом) индивидуальных белков непосредственно в геле. Анализ полученных спектров проводили с использованием базы данных Национального центра биотехнологической информации (NCBIprot).

Результаты. В результате протеомного анализа (ПА) образца субстанции панкреатина были идентифицированы аминокислотные последовательности пептидных фрагментов, соответствующих панкреатическим ферментам свиного происхождения. Полученные результаты доказывают, что фармацевтическая субстанция панкреатин является суммой ферментов поджелудочной железы свиного происхождения.

Заключение. В рамках настоящего исследования была показана возможность применения ПА для идентификации ЛС пептидной и белковой природы на примере субстанции панкреатина в целях создания СО.