Дисплей олиго-α-1,6-гликозидазы Exiguobacterium sibiricum на поверхности клеток Escherichia coli

Олиго-α-1,6-гликозидазы широко применяются в биотехнологии для гидролиза крахмала. Клеточный дисплей, основанный на использовании якорных мотивов белков внешней мембраны, позволяет экспонировать целевые пептиды и белки на поверхности микробных клеток, что способствует созданию технологически и экологически оптимальной среды для получения целевого продукта. Ранее нами была получена и охарактеризована рекомбинантная олиго-α-1,6-гликозидаза психротрофной бактерии Exiguobacterium sibiricum (EsOgl), демонстрирующая высокую каталитическую активность. Было также показано, что аутотранспортер АТ877 Psychrobacter cryohalolentis и его делеционные варианты эффективно экспонируют эстеразу EstPc и 10-й домен фибронектина III-го типа на поверхности клеток Escherichia coli. Целью работы явилось получение системы дисплея EsOgl на поверхности бактериальных клеток на основе АТ877. Сконструированы гены гибридного аутотранспортера EsOgl877 и его делеционных мутантов EsOgl877Δ239 и EsOgl877Δ310. Исследована ферментативная активность EsOgl877 и установлено, что клетки, экспрессирующие этот белок, сохраняли около 90% максимальной активности в температурном диапазоне 15-35 °C. Показано, что активность клеток, содержащих EsOgl877Δ239 и EsOgl877Δ310, была соответственно в 2,7 и 2,4 раза выше, чем клеток, экспрессирующих полноразмерный АТ. Анализ клеток, экспрессирующих укороченные варианты EsOgl877, после обработки протеиназой К показал, что пассажирский домен во всех случаях локализован на клеточной поверхности. Полученные результаты могут быть использованы для оптимизации систем дисплея олиго-α-1,6-гликозидазы и других гетерологичных белков на поверхности клеток E. coli.

секреция, аутотранспортер, олиго-α-1,6-гликозидаза, бактериальный дисплей